Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Аркадьева З.А. -> "Промышленная микробиология" -> 41

Промышленная микробиология - Аркадьева З.А.

Аркадьева З.А., Безбородое А.М., Блохина И.Н. Промышленная микробиология — M.: Высш. шк., 1989. — 688 c.
ISBN 5—06—001482—7
Скачать (прямая ссылка): promishmicrobiol1989.pdf
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 297 >> Следующая

Отобранный на одном этапе селекции мутант служит исходным для следующего этапа после такой же процедуры подготовки, какая была описана для исходной культуры (субклоииро-вание на основе естественной изменчивости с построением контрольного вариационного ряда). Известны случаи, когда субклонирование вновь полученного мутанта позволяло отобрать штамм с более высокой продуктивностью.
86
Последовательные этапы отбора, проводимого непосредственно по количественному признаку и требующего оценки многих тысяч клонов, позволяют «собрать» в геноме продуцента группу мутаций, сочетание которых и обеспечивает высокий уровень продукции. Наиболее эффективными обычно являются первые несколько этапов отбора, затем его темп падает; последнее в определенной степени преодолевается сменой мутагенного фактора, переходом на другую селекционную линию, введением некоторых мутаций.
4.4.2. Модификация метода отбора случайных мутаций
В работе со случайными мутациями пользуются приемами, предусматривающими оценку количественного признака гіосле культивирования выделенных в результате мутагенного воздействия клонов в условиях, специфически ограничивающих уровень продукции данного вещества у исходной культуры. Такие условия создаются обычно повышенным или, напротив, недостаточным содержанием какого-то компонента среды, влияющего на синтез продукта, неоптимальной температурой, продолжительностью культивирования, степенью аэрации и т. д. Оценка уровня продукции в таких условиях позволяет выявить мутанты, преодолевающие созданное ограничение и сохраняющие достаточно высокую продуктивность. Например, исходный штамм Corynebacterium glutamicurn был способен продуцировать большие количества глутаминовой кислоты (до 50 г/л) только в присутствии 2—3 мкг/л биотина. Это не позволяло использовать в питательной среде в качестве источника углерода дешевое и доступное сырье — свекловичную мелассу, содержащую обычно много биотипа. Оценка около 8000 клонов на средах с повышающимся от этапа к этапу содержанием биотина позволила получить в итоге такой селекции штамм, продуцирующий глутаминовую кислоту (50 г/л) на мелассных средах. Интересно, что на одном из этапов селекции были обнаружены две «сопутствующие» повышению продуктивности мутации: ауксотрофиость по триптофану и чувствительность роста колоний к высокой температуре. Роль ауксотрофной мутации осталась неясной, однако мутацию удалось устранить (с помощью реверсии) без существенного ущерба для уровня продукции аминокислоты только через несколько последующих этапов селекции. Чувствительность к повышенной температуре сохранилась у всех продуктивных штаммов и, очевидно, явилась следствием структурных изменений в мембране. Такие изменения были необходимы клетке для выделения глутаминовой кислоты в присутствии избытка биотипа, способствующего формированию «непроницаемой» для этой аминокислоты мембраны.
Таким образом, ступенчатый отбор с оценкой только по количественному признаку, который ведется фактически «вслепую»
87
по отношению к мутациям, вызывающим сверхсинтез, в ряде случаев сам выявляет эти мутации и как бы «подсказывает» правильное направление селекции.
4.4.3. Отбор по количественному признаку среди мутантов с определенным фенотипом
Метод применяют, используя имеющиеся представления о пути, регуляции и взаимосвязях синтеза желаемого продукта у данного микроорганизма или у других, изученных в этом отношении. Такие представления в большей степени развиты сейчас для первичных метаболитов и в меньшей — для вторичных метаболитов и ферментов.
4.4.4. Ауксотрофные мутации
Использование ауксотрофных мутаций позволяет блокировать образование ингибитора или корепрессора синтеза желаемого продукта, перераспределить поток общих предшественников в разветвленных путях биосинтеза, уменьшить или остановить дальнейшее превращение нужного продукта. Ауксотрофные мутанты получают с помощью мутагенов, применяя известные методы, облегчающие отбор таких мутантов: метод обогащения, основанный на действии антибиотиков, в частности пенициллина, на растущие в минимальной среде, т. е. прототрофные, клетки, а также метод реплик. У полученных ауксотрофных мутантов определяют питательные потребности, отбирают мутанты с той потребностью, которую хотели получить, и у последних оценивают способность продуцировать желаемое вещество. При этом необходимо помнить, что питательная среда для ауксотрофа-продуцента должна содержать требуемый для роста метаболит в ограниченном количестве, так как в большинстве случаев он подавляет синтез нужного продукта. Количество оцениваемых па продуктивность ауксотрофных мутантов с одинаковой питательной потребностью не должно быть сведено к одному-двум мутантам, хотя иногда и этого количества достаточно для достижения ожидаемого эффекта. Если потребность в метаболите может быть обусловлена блокированием разных этапов его синтеза, то не на каждом этапе мутация даст эффект. Кроме того, ауксотрбфность не всегда вызывается блоком в пути синтеза; например, для аминокислот она может быть вызвана мутацией, нарушающей включение их в белки. Поэтому целесообразно получить и оценить продуктивность нескольких десятков мутантов с качественно одинаковой потребностью для того, чтобы выбрать наиболее продуктивный, если расчет на ауксотрофность оказался верным, и составить обоснованное представление о влиянии данной мутации на продукцию желаемого вещества.
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 297 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама