Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Аркадьева З.А. -> "Промышленная микробиология" -> 42

Промышленная микробиология - Аркадьева З.А.

Аркадьева З.А., Безбородое А.М., Блохина И.Н. Промышленная микробиология — M.: Высш. шк., 1989. — 688 c.
ISBN 5—06—001482—7
Скачать (прямая ссылка): promishmicrobiol1989.pdf
Предыдущая << 1 .. 36 37 38 39 40 41 < 42 > 43 44 45 46 47 48 .. 297 >> Следующая

Отбор среди ревертантов ауксотрофных мутантов, у которых ауксотрофность вызвана дефектом определенного фермента в пу-
88
ти синтеза метаболита, позволяет получить мутанты с восстановленной каталитической, но утраченной регуляторной функцией фермента, катализирующего синтез данного продукта, а также мутанты с неполным восстановлением каталитической функции, т. е. снижением активности фермента по отношению к активности фермента прототрофного штамма или, напротив, с усилением его активности. Перечисленные типы реверсий затрагивают один и тот же дефектный у ауксотрофа ген —- они относятся к истинным реверсиям и имеют характер внутригеииых супреесорных реверсий. Если же ауксотрофиость вызвана нарушением включения аминокислоты в белки, то у супреесорных ревертантов такого ауксотрофа восстановление способности к прототрофному питанию может быть связано с мутацией другого гена, например кодирующего регуляторный фермент в биосинтезе данной аминокислоты. Такая мутация, нарушая регуляцию синтеза аминокислоты, вызывает ее сверхсинтез, чем и преодолевается (супрессируется) ауксотрофиость мутанта. Супрессорная мутация в другом гене может включить в особых случаях дополнительный, обходной путь синтеза, продукты которого не препятствуют синтезу нужного метаболита. Межгенные супрессорные реверсии в некоторых случаях затрагивают и регуляторные гены синтеза метаболита, например у ауксотрофа но гистидину Bacillus subUlis, дефектный ген которого сцеплен с генами триптофапового оиероиа, реверсия к прототрофиости может быть вызвана мутацией в регуляториом гене этого оперона, одновременно приводящей к сверхсинтезу триптофана.
Получить ревертанты к прототрофиости несложно. После обработки мутагеном клетки ауксотрофа в большой концентрации (как правило, без дополнительного разведения суспензии) высевают на чашки с агаризованной минимальной средой или со средой, в которой отсутствует фактор, компенсирующий данную ауксотрофиость. В течение инкубации целесообразно отмечать колонии, появляющиеся в ранние и поздние сроки. Это связано с тем, что искомые ревертанты чаще всего находятся среди позднее появляющихся и медленно растущих (мелких) колоний, так как нужная реверсия может не полностью восстановить прототрофный фенотип. Выросшие колонии отсевают на минимальную среду желательно с рассевом до отдельных колоний, чтобы освободиться от ауксотрофиых клеток, составлявших «фон» на чашках при появлении колоний ревертантов. Выросшие на минимальной среде колонии (обычно по одной от каждой первичной колонии ре-вертанта) пересевают на полноценную среду, и полученные клоны затем оценивают на способность продуцировать желаемое вещество. Если исходный ауксотрофный штамм не продуцировал это вещество, удобно первичную оценку осуществить с помощью тест-культуры в тех случаях, где это возможно. Для продуцентов первичных метаболитов тест-культурой служат ауксотрофные мутанты с потребностью в данном метаболите, для продуцентов антибиотиков — штаммы, чувствительные к бактерицидному
89
действию последних. Высев с помощью репликатора проверяемых ревертантов на агаризованную среду, содержащую клетки тест-культуры, позволяет очень быстро среди большого числа клонов выявить те, вокруг которых образуются зоны роста или зоны подавления тест-культуры. Только у таких клонов затем количественно оценивают уровень продукции в соответствующих условиях культивирования. Обычно для выделения искомой мутации среди ревертантов ауксотрофного штамма требуется проверка нескольких сотен прототрофных клонов, тогда как поиск среди прямых мутаций может потребовать проверки многих тысяч клонов.
4.4.5. Отбор среди мутантов, резистентных к структурным аналогам аминокислот
или азотистых оснований
Отбор среди таких мутантов — один из широко применяемых и эффективных методов получения и улучшения штаммов продуцентов первичных метаболитов. Из числа различных структурных аналогов этих веществ наиболее пригодны для селекционных целей те, которые действуют на регуляторпые системы синтеза подобно природному метаболиту, но не могут выполнить основной функциональной роли этого метаболита в клетке. Так, аналог аминокислоты, добавленный к клеткам, находящимся в минимальной среде, имитирует избыток этой аминокислоты на уровне систем, контролирующих ее синтез (регуляториых ферментов и (или) регуляториых генов), по при этом не может заменить аминокислоту в белках: не способен включиться в белок или, включаясь, приводит к образованию дефектных белков, вызывая в обоих случаях голодание клетки по природной аминокислоте и останавливая рост. Добавление природной аминокислоты вместе с ее аналогом устраняет это голодание. В этих условиях клетка, прекратив синтез аминокислоты вследствие избытка последней и присутствия аналога, использует «внешнюю» аминокислоту для жизнедеятельности.
Способность аналога подавлять рост клеток и очевидное устранение этой способности в присутствии добавленного природного метаболита являются основными «приметами» пригодности аналога для селекционной работы. Эти свойства необходимо установить при его выборе среди других аналогов, так как многочисленные структурные аналоги природных метаболитов имеют и другие способы взаимодействия с микробной клеткой.
Предыдущая << 1 .. 36 37 38 39 40 41 < 42 > 43 44 45 46 47 48 .. 297 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама