Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Аркадьева З.А. -> "Промышленная микробиология" -> 43

Промышленная микробиология - Аркадьева З.А.

Аркадьева З.А., Безбородое А.М., Блохина И.Н. Промышленная микробиология — M.: Высш. шк., 1989. — 688 c.
ISBN 5—06—001482—7
Скачать (прямая ссылка): promishmicrobiol1989.pdf
Предыдущая << 1 .. 37 38 39 40 41 42 < 43 > 44 45 46 47 48 49 .. 297 >> Следующая

Для получения аналогорезистеитных мутантов суспензию клеток исходной культуры после обработки мутагеном высевают в большой концентрации (газоном) на чашки Петри с агаризоваи-ной минимальной средой, содержащей аналог в заранее подобранной концентрации, иигибирующей рост исходной культуры. На таких чашках через несколько суток инкубации появляются колонии мутантов, преодолевающих действие аналога. Часть та-
90
ких мутантов имеет мутации, нарушающие регуляцию синтеза желаемого метаболита и вызывающие его сверхсинтез, другая часть — мутации, нарушающие транспорт аналога в клетку, могут быть и другие мутации. Для наглядности можно рассмотреть свойства нескольких классов мутантов Е. coli, отбираемых по резистентности к аналогу триптофана.
Мутанты Escherichia coli, резистентные к 5-метилтриптофану
Мутантний ген Эффект мутации
Регулятор trpR Конститутивный синтез ферментов оперона
Оператор Частично конститутивный синтез ферментов оперона
Структурный ген trpE Десенсибилизация антранилатсинтетазы к триптофану
Структурный ген пер- Нарушение транспорта триптофана в клетку меазы
Структурный ген амино- Изменение амимоацил-тРНК-синтетазы ацил-тРНК-синтетазы
Способностью продуцировать триптофан характеризовались мутанты только трех первых классов.
После отсева колоний, выросших на среде с аналогом, и выделения у них отдельных клонов из каждой первичной колонии проверяют по 1—2 клона на способность продуцировать нужное вещество. Если исходный штамм не продуцировал этот метаболит, то первичную оценку мутантов проводят с помощью аук-сотрофной по данному метаболиту тест-культуры, отбирая для дальнейшей оценки те клоны, которые обеспечивают зоны роста, или «кормление», ауксотрофных клеток. В тех случаях, когда исходная культура уже являлась продуцентом, необходима тотальная проверка всех выделенных клонов на способность продуцировать метаболит в соответствующих условиях культивирования. Из их числа отбирают те, у которых при последующих проверках средний уровень продукции достоверно превышает средний уровень продукции исходного (родительского) штамма. При правильно выбранном аналоге для получения продуктивного мутанта обычно требуется проверить несколько сотен анало-горезистентных клонов. У отобранного продуктивного штамма часто определяют чувствительность к более высоким, чем ранее использованная, концентрациям аналога. Если такая чувствительность имеется, проводят еще один, а иногда и несколько этапов отбора на постепенно повышающихся концентрациях аналога. Нередко используют другие аналоги того же метаболита на следующих этапах отбора.
У отобранных аналогорезистентны'х штаммов очень важно исследовать природу того регуляторного нарушения, которое привело к сверхсинтезу или повысило его уровень. Для этого у исходного штамма и мутанта определяют удельную активность регуляторного фермента (или ферментов) в пути синтеза данного метаболита, изучают in vitro действие этого метаболита и других ингибиторов на активность фермента. Характер действия аналога
91
метаболита на активность фермента полезно знать и до начала селекции. Для выяснения вопроса о регуляции синтеза метаболита по типу репрессии конечным продуктом удельную активность регуляторных ферментов исходного штамма и мутанта определяют после выращивания в средах, содержащих метаболит (конечный продукт), и без него.
Сведения о природе достигнутых на отдельных этапах селекции регуляторных и других изменений позволяют правильно выбрать метод селекции для следующего этапа. Следует отметить, что у одноступенчатых аналогорезистентных продуктивных мутантов может быть обнаружено одновременно несколько мутаций.
Типичным мутационным нарушением, приводящим к сверхсинтезу у отбираемых по продуктивности аналогорезистентных мутантов, признается утрата чувствительности регуляторного фермента (десенсибилизация) к ингибированию конечным продуктом, которым обычно и является желаемый метаболит, а также нарушение механизма репрессии синтеза ферментов, что обеспечивает их неконтролируемый (конститутивный) синтез. Имеются данные о том, что регуляторным мутациям у аналогорезистентных продуктивных мутантов сопутствуют и транспортные мутации, нарушающие поступление аналога и природного метаболита в клетку. Транспортные мутации без регуляторных вызывают продукцию метаболита очень редко и в незначительных количествах.
Природа резистентности к аналогу лизина 5-(2-аминоэтил)-цистеину
у различных мутантов, выделяющих лизин
Микроорганизм
Brevibacteriutn flavutn, Corynebacte-rium glutamicum
Pseudomonas acidovorum
Escherichria coli
Эффект мутации
Десенсибилизация асиартокипазы
Десенсибилизация дегидродипиколи-иатсинтетазы и гомосериидегидроге-H азы
Десенсибилизация дегидродипиколи-
иатсинтетазы Десенсибилизации аепартокиназы
Нарушение транспорта лизина и клетку
Приведенные выше данные можно рассматривать как примеры регуляторных мутаций у мутантов разных микроорганизмов, резистентных к аналогу одной ив аминокислот.
4.4.6. Отбор среди мутантов, резистентных к антибиотикам
Предыдущая << 1 .. 37 38 39 40 41 42 < 43 > 44 45 46 47 48 49 .. 297 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама