Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 18

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 12 13 14 15 16 17 < 18 > 19 20 21 22 23 24 .. 106 >> Следующая

Определение з является непосредственной задачей в большинстве экспериментов по скоростной седиментации, а решение её осуществляется на аналитической центрифуге (рис.26). Прибор снабжен оптической системой,позволяющей определять распределение концентраций в любой момент времени в течение всего измерения.
Рис.26. Схема аналитической ультрацентрифуги.
I-мотор;2-ротор;3-брони-рованная камера;4-зеркало ;5-камерная линза; б-путь света;7-держатель фотопленки;8-панель контроля скорости:9-контроль температуры;10-источник света;И-вакуумный насос;
12-охлаждение.
Ротор находится в бронированной охлаждаемой камере в вакууме и подвешивается на струне,соединенной с ведущим валом мотора. В наконечнике ротора имеется термисторный датчик температуры.
67
Электрический контакт термистора с контрольным устройством осуществляется через контакт с ртутью, с которой соприкасается наконечник ротора. Камера с ротором оборудована верхней и нижней линзами. Нижняя линза служит коллиматором, через неё в аналитическую ячейку попадают параллельные лучи. Верхняя линза и камерная линза фокусируют проходящий свет на фотопленку, на которой регистрируется распределение концентрации образца в ячейке центрифуги. Аналитическая ячейка (рис.27) емкость кото-
з
рой,как правило, равна I см , имеет секториальную форму. На торцах аналитической ячейки имеются окошки с кварцевыми стеклами. Для уравновешивания аналитической ячейки в ротор вставляется балансировочная ячейка, которая представляет собой ме-талический блок с прецизионной системой. В ней имеются также два индексных отверстия, находящиеся на строго определенном расстоянии от оси вращения, с помощью которых определяют соответствующие расстояния в аналитической ячейке. Оптические системы аналитических ультрацентрифуг позволяют наблюдать за седимента-
ода центрифугирования.Через заданные промежутки времени седи-
цией частиц в течение всего пери-
ментирующий материал можно фотог-
Центробежная
сила
9
рафировать. При фракционировании белков и ДНК за седиментацией наблюдают по поглощению в ультрафиолете, а в тех случаях, когда исследуемые растворы имеют разные коэффициенты прелом-
Рис.27. Аналитическая ячейка.-1-односектор-
ная ячейка;2-двусектор-
ца; 8-раствор;9-дно ячейки.
66
ления с помощью шлирен-систены или интерференционной системы Рэлея.Два последних метода основаны на том, что при прохождении света через прозрачный раствор состоящий из зон с различной плотностью, на границе зон происходит преломление света. При седиментации между зонами с тяжелыми и легкими частицами образуется граница, которая действует как преломляющая линза; при этом на фотопластинке, использующейся в качестве детектора, появляется пик. В ходе седиментации происходит перемещение границы, а следовательно и пика, по скорости передвижения которого можно судить о скорости седиментации материала (рис.28)
Направление седиментации
Рис.28. Различные стадии сироючнол (tm)йки седиментации макромоле-
кул (седиментограммы получают с помощью шлирен-системы,позволяющей определить коэффициент преломления раствора в любой точке ячейки в разные про-"аггег межутки времени. По мере движения макромолекул к дну ячейки в ходе седиментации высота пика уменьшается, а ширина его за счет диффузии образца увеличиваете^).
Определив коэффициент седиментации и коэффициент диффузии макромолекулы можно вычислить молекулярную массу по уравнению Сведберга:
М = -; (3)
D (1-?я)
гдей - газовая постоянная, Т-абсолютная температура,? -парциальный удельный объем макромолекулы, j> -плотность раствора,
* - коэффициент седиментации; М-молекулярная масса,d -коэффициент диффузии. Коэффициент диффузии макромолекул обычно изме-
69
ряют путем создания границы между буфером и раствором макромолекул с известной концентрацией с последующим наблюдением расширения этой границы во времени.
Аналитическое ультрацентрифугирование широко применяют для оценки чистоты препаратов ДНК, вирусов,белков,полисахаридов. В большинстве случаев о гомогенности препарата можно судить по характеру границы седиментации, используя метод определения скорости седиментации: гомогенный препарат обычно дает одну резкоочерченную границу. Присутствующие в препарате примеси проявляются в виде дополнительного пика или плеча; они обуславливают ассиметрию основного пика.
Еще одна область применения аналитического ультрацентрифугирования - исследование конформационных изменений макромолекул. Молекула ДНК, например, может быть одно - или двухцепо- . чечной, линейной или кольцевой. Под действием различных соединений (таких,например,как органические растворители) или при повышенных температурах ДНК претерпевает ряд обратимых и необратимых конформационных изменений*, которые можно установить по изменению скорости седиментации образца. Чем компактнее молекулы, тем меньше её коэффициент трения в растворе и наоборот: чем менее она компактна, тем больше коэффициент и, следовательно, тем медленнее будет она седиментировать. Таким образом, различия в скорости седиментации образца до и после различных воздействий на него позволяет обнаруживать конформационные изменения, происходящие в макромолекулах.
Предыдущая << 1 .. 12 13 14 15 16 17 < 18 > 19 20 21 22 23 24 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама