Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 22

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 16 17 18 19 20 21 < 22 > 23 24 25 26 27 28 .. 106 >> Следующая

Хроматографирование на бумаге проводят восходящим и нисходящим способами (рис.34). И в том и другом случае растворитель наливают на дно герметичной камеры для насыщения атмосферы парами растворителя, и лишь затем помещают в камеру бумагу. При восходящей хроматографии бумажную полосу подвешивают таким образом, чтобы нижний конец полосы бумаги был погружен в растворитель. По мере движения растворителя под действием калилярных сил вертикально вверх происходит разделение,веществ. При нисходящей хроматографии верхний конец бумажной полосы с образцом, нанесенным недалеко от кромки бумаги, закрепляют в лотке, находящемся в верхней части камеры, а нижний конец бумаги спускают вниз так, чтобы он не соприкасался с налитым на дно камеры растворителем. Перед началом хроматографирования лоток за-
82
полняют растворителем. Под действием капилярных сил и сил тяжести растворитель начинает двигаться вниз по бумажной полосе, в результате чего и происходит разделение.
Рис.34. Восходящая (а) и нисходя-
?ая (б) хроматография на бумаге, -крышк а;2-держатель;3-з ажим;
4-бумага;5-стеклянная камера; б-место нанесения пробы;7-растворитель; 8-стеклянная палочка;
9-лоток с растворителем.
а о
Из-за простоты первый вид хроматографии применяется чаще, однако скорость движения растворителя при нисходящей хроматографии гораздо выше, чем при восходящей.
Качество бумаги оказывает большое влияние на разделение анализируемых веществ. В СССР выпускается 3 сорта хроматографических бумаг - быстрая, средняя,медленная. Эти бумаги различаются по плотности, а следовательно, по скорости движения растворителя.
Бумага может быть загрязнена катноншш металлов или аминокислотами. Поэтому при использовании её не только для разделения, но и последующей элюции и определения количества веществ хроматографическую бумагу рекомендуется промывать. Чаще всего для этой цели используют 0,10-0,15^-ый раствор 8-оксихи-нолина в системе Н-бутанол-уксусная кислота-вода в соотношении 40:5:25.Листы бумаги погружают на 20-30 минут в кювету с этим раствором, затем вынимают и подсушивают на воздухе, образовавшийся комплекс 8-оксихинолина с катионами вымывают из бумаги
63
этим же растворителем, но без 8-оксихинолина. Промывание проводят в хроматографической камере нисходящим током растворителя до полного удаления темноокрашенных оксихинолятов, на что требуется 36-48 часов. Промытую бумагу высушивают в вытяжном шка-ФУ-
Можно промывать бумагу 1%-ным раствором НС1 или 2М раствором СНдСООН, а затем дистиллированной водой до отрицательной реакции на ион С1~ или до нейтральной реакции промывных вод.
Из бумаги вырезают хроматограмму по фигурному трафарету (рис.35). Длина хроматограммы зависит от высоты банки (в среднем она составляет 400 мм). Затем на хроматограмме простым ка-рандашбм проводят линию старта.
Рис.35. Фигурная хроматограмма,применяемая для лучшего разделения веществ (размеры указаны в мм).
84
Для хроматограмм с восходящим током растворителя она должна быть расположена на расстоянии 30-35 ым, а для хроматограмм с нисходящим током растворителя - на расстоянии 80-90 мм от края бумаги.
Количество наносимого на хроматограмму вещества должно быть достаточным для его обнаружения, но не слишком большим, так как это мешает разделению веществ. Удобно, когда объем пробы составляет 0,01-0,02 мл. Для обнаружения многих веществ достаточно нанести их на хроматограмму в количестве 50-500мкг.
Пробы чаще всего наносят градуированными микропипетками на 0,1-
0,2 мл, у которых оттянут кончик или специальными пипетками на 5,10,20 и 25 мкл, отградуированными весовым методом.
Обычно раствор анализируемого образца наносят в одну и ту же точку на стартовой линии несколько раз. Перед каждым последующим нанесением бумагу подсушивают током воздуха. Таким же образом на соседние полоски хроматограммы наносят растворы свидетелей, т.е. соединений определенного состава.
Подвижная фаза растворителя,применяемая для разделения веществ методом бумажной хроматографии, содержит, как правило,органический растворитель,насыщенный водой. В этой фазе' могут быть и другие компоненты, например, кислота (реже основание) Кислота (или основание) переводит компоненты разделяемой смеси в подходящую для хроматографирования ионную форму.
Для приготовления подвижной фазы компоненты хроматографической смеси наливают в делительную воронку и тщательно перемешивают. Если все они полностью смешиваются, то смесь можно использовать сразу же после приготовления в качестве подвижного растворителя. В противном случае смеси дают расслоиться.
85
Верхний слой используют как подвижный растворитель, а нижний -для насыщения хроматографической камеры при нисходящем токе растворителя. При разделении веществ восходящим током растворителя подвижную фазу, насыщенную неподвижной, наливают на дно камеры. Полоску бумаги с нанесенными свидетелями и анализируемой смесью погружают нижним концом в растворитель на глубину 10-15 мм. Верхний конец бумажной полосы закрепляют так, чтобы бумага свободно свисала вниз, не касаясь дна и стенок камеры. Бумагу крепят к стеклянным палочкам, закрепленным в верхней части камеры, специальными прищепками или прошивают верхний крнец бумаги ниткой и подвешивают хроматограмму, закрепив концы ниток на наружной стороне камеры пластилином.
Предыдущая << 1 .. 16 17 18 19 20 21 < 22 > 23 24 25 26 27 28 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама