Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 24

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 18 19 20 21 22 23 < 24 > 25 26 27 28 29 30 .. 106 >> Следующая

Молекулы,имеющие размер меньше, чем размер пор геля, будут проходить через зерна геля по этим порам. Такие молекулы
89
диффундируют внутрь частиц геля, но опять-таки различные молекулы проникают в частицы в разной степени," зависимости от своих размеров. Таким образом,чем меньше размеры молекул, тем медленнее они передвигаются по колонке. Сечение колонки, проницаемое для наиболее мелких молекул,наибольшее и поэтому движение их наиболее медленное (элюируемый объем таких веществ будет наибольшим по отношению к свободному объему колонки). Таким образом происходит фракционирование веществ по молекулярным массам.
На основании характеристик различных гелей для каждого конкретного случая можно выбрать тот или иной тип геля. Если необходимым требованиям одновременно удовлетворяют несколько гелей, то целесообразно выбирать гель с наименьшей величиной поглощения воды, т.е. с наибольшим числом поперечных связей.
Перед заполнением колонки гель должен полностью набухнуть. Для этого навеску геля выдерживают в воде или лучше в слабом солевом растворе. В результате электростатического притяжения отдельные частицы геля могут слипаться; в растворах электролитов этого не происходит. Если не-дать гелю предварительно набухнуть, то окончательное набухание произойдет после внесения его в колонку, что значительно снизит скорость протекания растворителя из-за слишком плотной набивки колонки.
Стеклянная хроматографическая колонка должна быть устроена таким образом, чтобы неподвижная фаза уходила до самого ее дна, т.е. чтобы "мертвое пространство" у основания колонки было минимальным; в противном случае уже разделившиеся молекулы будут скапливаться на дне и перемешиваться. Для этого в основание колонок впаивают, например, пористую стеклянную пластинку, на которую помещают съемную сетку из нейлона или шёлка, а затем нано-
сят неподвижную фазу. Другой более простой способ состоит в том, что на дно колонки кладут тампон из стекловолокна, капроновых или шёлковых ниток, а затем тонкий ровный слой кварцевого песка. Колонку заполняют кашицеобразной суспензией геля в подходящем растворителе. При этом верхний слой суспензии перемешивают, а стенки колонки слегка постукивают, что способствует удалению попавших в колонку пузырьков воздуха и равномерному ее заполнению. Заполнение осуществляют до требуемой высоты столба геля, а затем открывают кран и пропускают растворитель. (Установлено, что для эффективного разделения частиц методом гель-прони-кающей хроматографии соотношение высоты столба геля и его диаметра лежит в пределах 10:1 - 20:1). Необходимо следить за тем, чтобы заполненная колонка не высыхала; для этого над наполнителем должен всегда находиться слой растворителя. Чтобы уменьшить взмучивание верхнего слоя наполнителя при внесении в колонку образца, над ним обычно помещают кружок фильтровальной бумаги или прокладку из нейлона или шёлка.
Для нанесения образца избыток растворителя отсасывают из верхней части колонки пипеткой, а остатку дают впитаться в наполнитель. Затем при помощи пипетки осторожно наносят образец и также дают ему впитаться; остатки образца смывают со стенок колонки небольшой порцией растворителя. После этого колонку заполняют свежим растворителем, создавая слой в 5-10 см, и соединяют с резервуаром, который находится над колонкой и содержит большой объем растворителя, что позволяет поддерживать нужный слой растворителя в колонке.
Рекомендуется вносить образец в возможно малом объеме растворителя. Это позволяет сосредоточить разделяемые частицы в уз-
91
кой полосе ухе в самом начете разделения.
Скорость протекания элюирующего раствора через колонку в ходе разделения должна быть постоянной. Элюируемый с колонки раствор (элюат) собирают в виде небольших фракций, каждая из которых составляет 2-5% общего объема колонки. Фракции собирав ют в пробирки. Каждое соединение обычно распределено по нескольким пробиркам. Существует целый ряд автоматических коллекторов фракций, с помощью которых можно собирать определенные объемы элюата в автоматически сменяющие друг друга пробирки (рис.36).
/
Рис.36. Установка для гель-проникающей хроматографии.
92
Гель-проникающая хроматография находит широкое применение в биохимических исследованиях. Она используется в основном для очистки высокомолекулярных биологических соединений. С помощью соответствующих гелей проводят разделение и очистку вирусов, белков,ферментов,гормонов,антител,нуклеиновых кислот и полисахаридов. Методом проникающей хроматографии можно разделять смеси низкомолекулярных соединений, отделять аминокислоты от пептидов, моносахара от полисахаридов, фракционировать пептиды, олигосахариды и олигонуклеотиды, образующиеся в результате частичного гидролиза белков,полисахаридов и нуклеиновых кислот, соответственно.
Гель-хроматографию можно использовать для определения молекулярных масс биологических соединений. Прокалибровав колонку с помощью веществ (чаще всего белков), размеры молекул которых известны, и сопоставив кривую элюции неизвестного вещества с калибровочной кривой, можно определить молекулярные массы неизвестных компонентов системы. Однако следует помнить, что фракционирование веществ по молекулярной массе при гель-хроматографии зависит не только от величины молекул, но и от их,формы и химического строения. Поэтому размеры молекул, определенные с помощью этого метода, весьма приблизительны и требуют всегда уточнения с помощью других методов.
Предыдущая << 1 .. 18 19 20 21 22 23 < 24 > 25 26 27 28 29 30 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама