Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 28

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 106 >> Следующая

Приготовление препаратов Фиксированных клеток Простые и сложные методы окраски микроорганизмов.
Для количественного учета, изучения морфологии и особенно деталей строения микробных клеток (выявления спор,капсул,органоидов, включений и т.д.) необходимо зафиксировать и окрасить их. С^этоЗ целью готовят мазок, начиная с обезжиривания чистого предметного стекла, как это описано выше. На обезжиренное стекло наносят небольшую каплю физиологического раствора или воды и в нее вносят с помощью петли, соблюдая правила асептики,
105
исследуемый микробный материал, который распределяют на поверхности площадью приблизительно 2,0 см*" тонким слоем. Если микроорганизмы выращены на жидкой питательной среде, микробную культуру берут петлей и наносят на обезжиренное стекло (без воды).
После этого мазок высушивают на воздухе и фиксируют. В процессе фиксации микробные клетки погибают, этим достигается безопасность работы с ними, что особенно важно при исследовании патогенных микроорганизмов. Убитые клетки значительно лучше воспринимают красители, чем живые. Кроме того, в фиксированном мазке клетки приклепляются к стеклу и не смываются при последующей обработке.
Методы фиксации подразделяют на физические и химические. Физический метод - фиксация в пламени горелки или спиртовки в течении нескольких секунд - мазком вверх. Эту операцию проводят очень быстро после полного высушивания мазка, не перегревая его, т.к. при перегревании могут произойти грубые изменения структурных элементов клетки.
Химические методы фиксации более мягкие по сравнению с фиксацией в пламени. В качестве фиксаторов применяют жидкие растворители, при этом мазок для фиксации погружается в жидкость на определенное время или фиксатор наливают на мазок. Химическую фиксацию ведут:
1) этанолом (96%) 10-15 минут;
2) ацетоном - 5 минут;
3) смесью Никифорова (этиловый спирт:серный эфир - 1:1) -
10-15 минут;
4) метанолом - 3 минуты;
5) в парах осмиевой кислоты - несколько секунд;
106
6) формалином - несколько секунд;
После фиксации мазок можно окрашивать.
Окраску микробиологического мазка производят простыми или сложными методами. Простые методы - обработка мазка каким-нибудь одним красителем. При этом прокрашивается вся клетка, ее форма. и размеры становятся хорошо видны. Для окраски микробов используют красители анилинового ряда, они могут быть основными и кислыми, если красящий ион (хромофор) - катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель
- кислый. Кислые красители -эритрозин,кислый фуксин,зозин. Основные красители - генциан -виолет, кристалл-виолет, метиленовый синий, основной фуксин. Основные красители более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Для окраски микроорганизмов преимущественно' используют основные красители. Из сухих красителей,продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них - водноспиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток (см. Приложение). Фиксированный мазок обкрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску мазка основным фуксином ведут в течение
2 минут, метиленовым синим - 5-7 минут. Затем мазок промывают водой до тех пор, цока струи воды, стекающие с мазка, не станут бесцветными, высушивают с помощью фильтровальной бумаги и микрос копируют в иммерсионной^системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.
у
Сложные методы окраски микроорганизмов применяются для изучения структуры клетки и дифференциации одних микробов от других Они отличаются от простых прежде всего тем, что фиксированный
107
мазок подвергается воздействию нескольких красителей и других 1
химических веществ.
Окраска по методу Грама в модификации Синева
Дифференцированный метод окраски бактерий был предложен Граном в 1884 году. Этот метод очень важен,т.к.большинство микробов подразделяется по отношению к окраске по Граму на грам-положительные (грампозитивные или окрашивающиеся по Граму) и грамотрицательные (грамнегативные или не окрашивающиеся по Граму). Отношение к окраске по Граму является отличительным признаком микроорганизмов и учитывается в определении микроба.
Техника окраски
- Для окраски по методу Грама в модификации Синева подготавливают бумажки, пропитанные генциан-или кристаллвиолетом.
Для этого полоски фильтровальной бумаги пропитывают Lt спиртовым раствором красителя и высушивают (см. Приложение).
- На фиксированный мазок накладывают бумажки.пропитанные
краской, заливают небольшим количеством воды, краситель быстро диффундирует и окрашивает мазок. Окраску ведут 2 минуты. ^
а!
- Генциан-виолетовую бумажку удаляют пинцетом. Не промывая -
Ь
препарата водой, сливают краску и наносят раствор Люголя на п
30-60 секунд до почернения препарата.
- Сливают раствор Люголя, не промывая водой, погружают препарат в 96% этанол на 20-30 секунд. Обесцвечивание спиртом производят до отхождения фиолетовых струй краски.
- Препарат тщательно промывают водой для удаления спирта.
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама