Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 29

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 23 24 25 26 27 28 < 29 > 30 31 32 33 34 35 .. 106 >> Следующая

- Окрашивают мазок водным фуксином 2 минуты.
108
- Промывают мазок водой до тех пор пока струи воды не станут бесцветными.
- Высушивают препарат фильтровальной бумагой и микроскопи-руют его в иммерсионной системе.
/ Грамподожительные микроорганизмы окрашиваются в сине-фио-
грамотрицательные в светло-красный. )
летовыи цвет;
Механизм окраски по Граму. По современным представлениям, основанным на изучении физико-химического состава и структуры клетки,отношение к окраске по Граму обусловлено составом клеточной стенки[ микробов. У грамположительных бактерий муреин,составляющий каркас клеточной стенки,многослоен и содержит полимер углеводной природы - тейхоевые кислоты. Таким образом, в клеточной стенке грамположительных микробов количественно преобладают полимеры полисахаридной природы, связанные с белками.
Муреиновый каркас грамотрицательных бактерий однослоен, кроме того,клеточная стенка этих микробов содержит относительно большое количество липидов в. виде липопротеидов,фосфолипидов и ли-пополисахаридов.
При окраске по Граму в клетках на уровне плазмолеммы идет образование комплекса генициан-виолет + йод. Этот комплекс нерастворим в воде и слабо растворим в спирте. При обработке этанолом он проходит через клеточную стенку грамотрицательных микробов, вымывается из клеток, последние становятся бесцветными и докрашиваются фуксином,приобретая красный цвет. Клеточная стенка грамположительных микробов, благодаря присутствию большого .количества полисахаридов не пропускает комплекса "генциан -виолет + йод" и грампозитивные микробы остаются -сине-фиолетового цвета. Способность окрашиваться или не окрашиваться по
109
Граму - достаточно постоянный видовой признак микроорганизма, однако следует обращать внимание на возраст микробной культуры. Так,например,известно,что некоторые спорообразующие бактерии будучи грамположительными в молодых культурах (после 20-24 часов выращивания в термостате) с возрастом неодинаково интенсивно окрашиваются по Граму. Поэтому рекомендуется окрашивать по Граму молодые (односуточные) культуры микроорганизмов для изучения их морфологии и других целей.
Для того,чтобы проконтролировать правильность окраски по Граму исследуемого микроба,на одном предметном стекле делают три мазка,по краям мазки культур п известным отношением и окраске,например Each. coli - грамотрицательные бактерии и Jac. mesentericus - грамподожительные бациллы, а в центре мазок исследуемого микроба. Мазки должны быть приготовлены одинаково, т.е. иметь одну и ту же толщину,размер и т.д.,окраску следует вести одновременно. В том случае,если тест-микробы окрасились при этих условиях правильно.можно считать верной окраску исследуемой культуры.
Окраска по методу Пиля-Нильсена
Этот метод применяется для выявления спор и окрашивания кислотоупорных микроорганизмов.
Техника окраски:
- Фиксированный мазок покрывают фильтровальной бумажкой и наливают карболовый фуксин Циля.Затем,держа препарат пинцетом, мазок подогревают до появления паров над пламенем горелки. Добавляют новую порцию красителя и повторяют манипуляцию в течении 3-S минут.
- Снимают бумажку пинцетом и после охлаждения предметного
ПО
стекла до комнатной температуры тщательно промывают мазок водой.
- Обесцвечивают мазок 5% HgSO^, опуская его на 20-30 секунд в стаканчик с кислотой,затем препарат тщательно промывают водой.
- Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего в течении 5 минут,промывают водой,высушивают,осторожно накладывая фильтровальную бумагу, и микроекопируют с помощью иммерсионной системы.
Споры бактерий,окрашенные по методу Циля-Нильсена,выглядят рубиново-красными,вегетативные клетки - голубыми.Бактериальная спора имеет высококонцентрированную протоплазму и окружена плотной многослойной оболочкой,содержащей липида и дипиколинат кальция. Карболовая кислота (фенол),входящая в состав фухсина Циля,является гидролизующим агентом,размягчающим оболочку споры. Размягчению способствует также повышенная температура. Фуксин, проникший в спору и окрасивший ее протоплазму,прочно удерживается ею и не обесцвечивается серной кислотой, протоплазма же вегетативных клеток обесцвечивается кислотой и докрашивается метиленовой синью.
Устойчивость некоторых микроорганизмов к кислотам связана с наличием в их клеточной стенке липидов и восковых веществ.По методу Циля-Нильсена кислотоупорные микроорганизмы (например, микобактерии туберкулеза) окрашиваются в красный цвет и не обесцвечиваются кислотой.
Метод Ожешки также служит для выявления спор.
1). Приготавливают мазок и высушивают его.
2). Не фиксируя,наливают на мазок 0,5^ раствор соляной кислоты,которая служит в качестве протравы. Подогревают т-2 минуты до появления паров и сливают кислоту.
3). Мазок промывают водой,просушивают,фиксируют
III
в пламени спиртовки.
4) Накладывают на мазок фильтровальную бумажку и окрашивают при подогревании фуксином Циля около 3-х минут-, как указано вше.
5) Обесцвечивают препарат 5%HgS0^.
6) Промывают водой.
7) Окрашивают метиленовым синим 5 минут.
8) Промывают водой, высушивают и микроекопируют в иммерсионной системе. Споры, прочно адсорбировавшие фуксин, красного цвета, вегетативные клетки - голубые.
Предыдущая << 1 .. 23 24 25 26 27 28 < 29 > 30 31 32 33 34 35 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама