Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 52

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 46 47 48 49 50 51 < 52 > 53 54 55 56 57 58 .. 106 >> Следующая

Чтобы получить из смешанной культуры чистую, прибегают к методу накопительной культуры, т.е. культуры, обогащенной необходимым видом микроба. Накопительные культуры получают, создавая элективные условия для их выращивания, т.е. условия, обеспечивающие преимущественное развитие определенной группы или вида микроорганизмов. При создании элективных условий учитывают особенности физиологии и обмена веществ микробов,
222
их требования к источникам питания, отношение к pH среды, аэрации, температуре, способность к образованию эндоспор и др. Элективные условия не всегда оптимальны для роста учитываемой группы микроорганизмов, но все же они лучше переносятся ими, чем сопутствующими формами.
Выделение чистых культур аэробных микроорганизмов
Методы выделения чистых культур микробов можно подразделить на две основные группы: а) методы,основанные на принципе механического разделения микробов; б) методы, основанные на биологических особенностях микроорганизмов.
Методы механического разделения микробов.
1. Метод последовательных разведений по Пастеру. Берут ряд пробирок с жидкой питательной средой, в первую вносят исследуемый материал, далее, перенося из пробирки в пробирку определенный объем жидкости, получают ряд серийных разведений.
При этом в первых пробирках будет содержаться большое количество микробных клеток, а в одной из последних теоретически может находиться одна клетка. Создав условия для роста и размножения микробов в этой пробирке можно получить чистую культуру.
В других же пробирках будет расти смесь микробов. Этот метод в чистом виде в настоящее время почти не применяется.
2. Метод Коха. Берут 6-10 пробирок с 9 мл стерильного расплавленного и охлажденного до 50° агара. I мл исследуемого материала вносят в первую пробирку, хорошо перемешивают, затем I мл из первой пробирки переносят во вторую и т.д., т.е. готовят ряд последовательных разведений. Затем агар из проби-
223
рок выливают в стерильные чашки Петри, которые после застывания агара помещают в термостат с соответствующей температурой. Каждая живая клетка, попавшая в агар7начнет размножаться и образует колонию. В чашках, содержащих большое количество бактерий, будет наблюдаться обильный рост, колонии будут сливаться, и чистую культуру получить на таких чашках трудно. В последующих разведениях будут образовываться отдельные колонии, из которых легко выделить чистую культуру.
3. Рассев шпателем по Дригальскому. Берут 3 чашки Петри с питательной средой. На первую петлей или пипеткой наносят каплю исследуемого материала и растирают шпателем по всей поверхности питательного агара. Затем шпатель переносят на другую чашку и втирают оставшихся на шпателе микробов в поверхность питательной среды. Далее шпатель переносят на третью чашку и аналогичным образом производят посев. На первой чашке вырастет макримальное количество колоний, на третьей - наименьшее. В зависимости от содержания микробных клеток в исследуемом материале на одной из чашек разовьются отдельные колонии, пригодные для выделения чистой культуры микроорганизма.
4. Рассев петлей. Метод принципиально не отличается от предыдущего, но более экономичен. Берут одну чашку Петри с питательным агаром и делят ее на 4 сектора, проводя разграничительные линии на внешней стороне дна чашки. Отжатую петлю исследуемого материала вносят в первый сектор и проводят этой петлей параллельные линии по всему сектору на расстоянии одна от другой около 5 мм. Этой же петлей, не изменяя ее положения
224
по отношению к агару, проводят такие же линии на других секторах чашки. В том месте, где на агар попало большое количество микробных клеток;рост микроорганизмов будет в виде сплошного штриха. На секторах, куда попало небольшое количество клеток, разовьются отдельные колонии.
5. Метод фильтрации основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделении содержащихся микроорганизмов по величине.
Этот метод применяется главным образом для очистки вирусов от бактерий.
6. Метод получения одноклеточной культуры- с помощью микроманипулятора. Все описанные выше методы не гарантируют получения чистой культуры как потомства одной бактериальной клетки, поскольку колонии, развивающиеся из одной, двух или более близко расположенных клеток практически неразличимы. Для получения чистой культуры рассев следует повторить несколько раз для выявления возможного загрязнения.. Однако существуют методы, позволяющие получить потомство одной единственной бактериальной клетки. Один из них - предусматривает использование микроманипулятора. Это прибор, с помощью которого под контролем глаза через микроскоп можно захватить одну микробную клетку и перенести ее'в питательную среду.
7. Выделение одноклеточной культуры в висячей капле является другим методом, позволяющим получить потомство одной микробной клетки. Для этого на покровное стекло с помощью стерильного чертежного пера наносят несколько капель суспензии
225
микробных клеток в питательной среде. Диаметр капли около I мм. Концентрацию клеток подбирают таким образом, чтобы в некоторых каплях содержалась одна микробная клетка. Покровное стекло с нанесенными каплями используют для приготовления препарата "висячая капля". Чтобы жидкость не высохла, на дно лунки помещают каплю воды, а края покровного стекла смазывают вазелином. Под микроскопом находят и отмечают на рисунке капли, содержащие одну клетку. Создают условия для роста микробной культуры. При необходимости поддерживать температуру выше комнатной используют специальный нагревательный столик, который помещается на предметный столик микроскопа. Под микроскопом наблюдают развитие микроколонии из одной клетки. Когда колония разовьется, ее осторожно переносят с помощью узкой полоски стерильной фильтровальной бумаги в питательную среду.
Предыдущая << 1 .. 46 47 48 49 50 51 < 52 > 53 54 55 56 57 58 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама