Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 56

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 50 51 52 53 54 55 < 56 > 57 58 59 60 61 62 .. 106 >> Следующая

Поэтому при измерении роста культуры бактерий массу и число микроорганизмов следует определять независимо друг от друга.
Измерение бактериальной массы
Величину биомассы определяют по ее сухому весу или с помощью химических анализов.
Определение сухого веса. К образцу культуры добавляют формалин до конечной концентрации 1%. Смесь переносят в заранее взвешенную пробирку и центрифугируют. Осевшие клетки промывают сначала 0,o5t раствором УаСС в растворе формалина, а затем 0,05% раствором УаСС или дистиллированной водой. Оса-
док сушат при 105° в сушильном шкафу до постоянного веса.
Химические анализы. 0 величине бактериальной массы часто судят по результатам определения бактериального азота или белка. Во многих случаях это верно,но если существенная часть азота клеток содержится в структуре, образование которой не зависит от роста цитоплазмы fнапример, капсулы бацилл, состоящие из полиглутаминовой кислоты), следует пользоваться другими методами. В подобных случаях можно определять ДНК или фосфор, содержащиеся в клетках микроорганизмов.
Светорассеяние. Количество света, рассеиваемого суспензией бактерий, пропорционально либо их концентрации (выраженной в единицах массы или числом клеток), либо средней длине бактерии. Общее количество рассеянного света пропорционально отношению размера частицы к длине волны падающего света. Отсюда следует, что: а) при данной длине волны падающего света рассеяние тем больше, чем крупнее микроорганизмы, и б) для микробов дачного размера светорассеяние тем больше, чем меньше длина волны падающего света. Светорассеяние, вызываемое микро-бами в питательном бульоне, наиболее удобно измерять Ьри 550 ммк, т.к. при этой длине волны оптическая плотность бульона минимальна. Для измерений используют фотоэлектроколориметр или спектрофотометр.
Я* пр.-т-ике ,1/я определения концентрации бактерий давно используется простой субъективный метод, основанный на визуальном сравнении мутности исследуемой бактериальной суспензии со стандартами мутности. Такими стандартами служат пробирки, содержащие различные суспензии, например,сернокислого ба-
рия или мелкоизмельченного стекла в воде. Для сравнения пробирки с анализируемой и' стандартной суспензиями ставят рядом на фоне белой карточки, на которую нанесены черные линии, располагая их так, чтобы на них падал свет_, лучше дневной. Опалесценцию анализируемой суспензии можно оценить с точностью порядка 10% от стандартной.
Определение общего числа клеток
Для определения общего числа клеток обычно используют счетные камеры, иногда применяют и другие методы, например, подсчет клеток в окрашенных мазках или измерение светорассеяния.
Счетные камеры. Подсчет в камерах возможен только для клеток, имеющих достаточно крупные размеры, позволяющие при микроскопировании применять оптические системы со сравнительно малым увеличением, он удобен для подсчета клеток дрожжей и крупных бактерий.
Счетная камера (Горяева, Тома) имеет вид толстого предметного стекла с углублением. На дно камеры нанесена сетка, разде- " ленная на ряд больших квадратов, часть которых разделена на 16 малых квадратов площан.ью l/400*fl|M^. Глубина камеры составляет
0,1 мм, таким образом, объем малого квадрата 1/4000 мм^.
Каплю суспензии бактерий помещают в камеру и накрывают толстым покровным стеклом. При необходимости суспензию разводят, чтобы в большом квадрате было не более 50 клеток. Для того, чтобы убедиться в полноте заполнения к.-шеры и, следовательно, в соответствии расчетного значения объема камеры дей-
ствительному объему находящейся в ней суспензии, покровное стекло следует несколько раз сместить в противоположные стороны. Образование колец Ньютона свидетельствует о правильном заполнении камеры. Прежде, чем перейти к подсчету, надо дать микробам осесть. Подвижные или патогенные формы следует предварительно убить нагреванием или с помощью формалина.
Чтобы результат подсчета был достоверен, в одной пробе I должно быть сосчитано не менее 600 клеток. Поскольку точность определения зависит от того, насколько плотно покровное стекло прилегает к поверхности камеры, следует установку стекла повторить несколько раз, например, четыре, каждый раз подсчитывая по 150 клеток.
Рекомендуется подсчитывать клетки в 10 больших квадратах при каждом заполнении камеры, далее вычислить среднее число клеток в одном большом квадрате (а) и рассчитать концентрацию клеток в суспензии по формуле
:[_а-Ю00 -4000 , ь 16
где х- число клеток в I мл суспензии
а- число клеток в одном большом квадрате Ь - разведение.
Подсчет клеток в окрашенных мазках . Пользуясь микропипеткой, наносят на предметное стекло каплю известного объема, например, 0,01 мл, и размазывают её так, чтобы она заняла площадь около I см*". Мазок фиксируют, окрашивают, после чего производят подсчет. Общее число микроорганизмов, содержащихся в 0,01 мл, равно числу клеток, видимых в поле зрения микроскопа, деленному на площадь поля зрения, выраженную в квадратных сантиметрах.
241
!
Площадь поля зрения определяют методом микрометрии (см. раздел "Измерение клеток").
Предыдущая << 1 .. 50 51 52 53 54 55 < 56 > 57 58 59 60 61 62 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама