Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 57

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 51 52 53 54 55 56 < 57 > 58 59 60 61 62 63 .. 106 >> Следующая

Подсчет микробных клеток в агаровых пленках . Равные объемы взвеси культуры и расплавленного агар-агара, содержащего небольшое количество туши, смешивают при 45°. Затем 0,005 мл смеси наносят микропипеткой на предметное стекло, нагретое до 45°. Препарат накрывают покровным стеклом и оставляют при комнатной температуре до застывания агара. В результате получают пленку толщиной 10-20 мкм. Подсчет клеток производят с помощью фазовоконтрастного микроскопа, снабженного объективом с масляной иммерсией. Величину площади, на которой локализуются учтенные особи, определяют методом микрометрии, а толщину пленки - по иониусу тонкой регулировки, фокусируя микроскоп на частицах туши, лежащих на предметном стекле и непосредственно под покровным стеклом.
Подсчет живых микроорганизмов
Жизнеспособными клетками считают микроорганизмы, способные образовывать макроскопические колонии на питательном ага- -ре или вызывать видимое помутнение при подсчете методом разведений. Величины, получаемые при подсчете живых микроорганизмов, нельзя считать абсолютными, т.к. они часто зависят от условий эксперимента (например, от питательной среда) и от состояния микроорганизма.
Существует два основных, метода подсчета живых организмов:
I. Метод подсчета колоний и 2.Метод серийных разведений. Более точные результаты дает первый метод.
Подсчет колоний. Различные методы подсчета колоний разли-
242
чаются в основном по способу выращивания отдельных, поддающихся учету колоний. Наиболее простой способ состоит в том, что посевной материал равномерно распределяют по поверхности хорошо высушенного питательного агара. При другом способе посевной материал сначала смешивают с расплавленным агаром и разливают в пустые чашки, или на поверхность застывшего питательного агара в чашке, или равномерно распределяют по стенкам пробирки.
Чтобы получить отдельные колонии, бактериальные суспензии приходится, как правило, разводить. Для этого удобнее всего, пользуясь некоторым постоянным коэффициентом разведения, получить серию разведений, концентрации которых образуют геометрическую прогрессию. Например, в пробирки наливайт по 9 мл физиологического раствора. В первую пробирку вносят I мл исходной суспензии, перемешивают, берут из нее I мл и вносят в следую-
О
щую пробирку и т.д., получая разведения 1:10,10 и т.д. При приготовлении разведений вегетативных клеток бактерий для кая" дого разведения следует использовать отдельную пипетку. Пренебрежение этой предосторожностью может привести к получению ошибочного результата, в результате чего часть их остается в пипетке и попадает в одно из последующих разведений. Суспензии спор ведут себя противоположным образом: при использовании вымытых кислотой пипеток на их стенках остается слой растворителя, совершенно не содержащего спор.
Метод серийных разведений. Готовят серийные разведения таким же образом, как для подсчета колоний. Материалом, взятым из приготовленных'-разведений, засевают определенное число пробирок; содержащих питательную среду. После инкубации
243
все пробирки, засеянные неразбавленным материалом, окажутся мутными, а пробирки, засеянные материалом в малых концентрациях - прозрачными. В ряду, где посев был произведен материалом промежуточной концентрации, часть пробирок окажется мутной, а часть прозрачной. Соотношение тех и других пробирок зависит от числа живых клеток в исходной культуре. ДЛя определения наиболее вероятного количества клеток в единице объема используют методы вариационной статистики (таблица Мак-Креди). Составляют числовую характеристику, которая включает три цифры. Первая цифра показывает число пробирок в том последнем разведении, при высеве из которого во всех засеянных пробирках отмечен рост. Две следующие.цифры обозначают число пробирок, в которых отмечен рост микроорганизмов при засеве их из двух последующих разведений. Затем по таблице находят наиболее вероятное число микроорганизмов, соответствующее данному значению числовой характеристики. Количество микробных клеток в I мл исходного субстрата соответствует этому числу, умноженному на то разведение, которое было взято для получения первой цифры числовой характеристики. Например,
Разведение исходной суспензии 0 1:10 1:100 1:1000 1:10003
Число засеянных пробирок 4 4 4 4 4
Число пробирок,в которых обнаружен рост 4 4 3 Т 0
Числовая характеристика 43Т
Наиболее вероятное число микробных клеток 15.5
' Наиболее вероятное число клеток в I мл(Тг)субстрата(У) 165
244
Для определения доверительного интервала используют коэффициент m, величина которого зависит от коэффициента разведения (К) условия значимости (Р) и числа засеянных пробирок ( п). Значение коэффициента m при К=Ю и Рд 95 в зависимости от числа засеянных пробирок дано в таблице.
Доверительный интервал вычисляют, используя формулу:
Значение коэффициентаm при К=10 и Pg gg в зависимости от
числа засеянных пробирок
Число засеянных пробирок I 2 3 4 5 6 ... 10
Коэффициент m 14,45 6,61 4,68 3,80 3,30 2,98 2,32
Следовательно, доверительный интервал количества клеток Т65
Предыдущая << 1 .. 51 52 53 54 55 56 < 57 > 58 59 60 61 62 63 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама