Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 58

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 52 53 54 55 56 57 < 58 > 59 60 61 62 63 64 .. 106 >> Следующая

лежит в пределах от до 165*3,8, т.е. в I мл субстрата количество клеток может быть от 43,4 до 627,0.
Чтобы получить достоверные результаты при использовании этого метода, необходимо соблюдать особую тщательность и аккуратность во время приготовления разведений и посева.
Изучение фаз роста микроорганизмов
Цель работы: изучить динамику роста популяции дрожжей на жидкой питательной среде, построить кривую роста.
Материалы: среда Чапека с добавлением 5% сусла в пробирках по 5 мл (на одну культуру 6 пробирок), или в качалочных колбах (по одной колбе на каждую культуру). Камеры Горяева, нефелометры.
Посев. Готовят взвесь дрожжевой культуры в физиологическом растворе. Подсчитывают ее концентрацию, которая должна
245
составлять около 5 млн клеток в I мл. Взвесью засевают питательную среду, внося 0,1 объема микробной суспензии на I объем питательной среды.
са, 4, б, 8, 24 и 48 часов.
Учет результатов. В каждой пробе определяют число дрожжевых клеток путем подсчета в камере или нефелометрически. Используя полулогарифмическую шкалу, строят кривую роста микробной популяции. Оценивают продолжительность каждой фазы роста культуры. Вычисляют константу скорости роста и время генерации (для логарифмической фазы роста) по формуле:
----- где В 0- начальная концентрация
К- константа скорости деления или число клеточных делений за
I час.
Выращивание. на качалках при 28°. Отбор проб через 2 ча-
G
К
клеток;
К - конечная концентрация клеток;
G - время генерации, т.е. время, требующееся для одного цикла деления.
Например, если за 8 часов число клеток в I мл возрастет от 5-10°
С
до 5-ТО , тогда
• а время генерации составляет
Т =2,4 часа.
= 0,416
0,416
24С
Литер ату р а
Ашмарин И. П., Воробьева А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.,1962.
Большой практикум по микробиологии. Под ред. Г.Л.Селибе-ра. М., 1962.
Елино вН.П. Общие закономерности строения и развития мик-робов-продуцентов биологически активных веществ. Л.,1977. Ежов Г.И. Руководство к практическим занятиям по сельскохозяйственной микробиологии. М., 1974.
Практикум по микробиологии. Под ред. Н.С.Егорова. М., Т976.
247
8. МОЛЕКУЛЯРНЫЙ СОСТАВ МИКРОБНОЙ КЛЕТКИ 8.1. ДЕЗИНТЕГРАЦИЙ МИКРОБНЫХ КЛЕТОК
ПОЛУЧЕНИЕ Ю1ЕТОЧНЫХ СТЕНОК МИКРООРГАНИЗМОВ.
ИЗУЧЕНИЕ ИХ УГЛЕВОДНОГО СОСТАВА.
Вопросы для подготовки по теме
1. Получение клеточных стенок микроорганизмов.
2. Качественные реакции на углеводы.
3. Количественное определение редуцирующих веществ в клеточной стенке.
4. Определение моносахаридного состава клеточной стенки методом распределительной хроматографии на бумаге.
5. Получение полисахаридных препаратов из клеточных стенок микроорганизмов.
6. Гель-хроматография полисахаридных препаратов.
Материалы, необходимые для лабораторных работ по разделу 8/.
Дезинтегратор для микроорганизмов, центрифуга (К-23, ЦЛН-2, или ЦНС-З, центрифужные стаканы, хроматографическая камера, хроматографическая бумага, трафарет для вырезания хроматографической бумаги, фотоэлектроколориметр, сушильный шкаф, водяная баня, весы (аналитические, торсионные, чашечные, для центрифужных пробирок), химические стаканы, колбы, мерные стаканы, мерные колбы разные, конические воронки № 2 и 4; пробирки химические, пипетки разные, стеклянные палочки, резиновые груши, фильтровальная бумага, ацетон, конц. HgSO^, Ъ% водный раствор фенола.
Получение клеточных стенок микроорганизмов
Цель работы . Познакомиться с методами дезинтеграции микроорганизмов на дезинтеграторе баллистического типа; изолировать
248
клеточные стенки дрожжевых клеток из гомогенизата после разрушения клеток.
Ход работы: Навеску воздушно-сухих дрожжевых клеток (Юг)
помещают в 200 мл стакан. Заливают в стакан 160 мл дистиллированной воды и, перемешивая стеклянной палочкой, готовят однородную суспензию микробных клеток. Полученную суспензию дрожжевых клеток загружают в дезинтегратор и подвергают разрушению в периодическом режиме, как было указано ранее.
После 5-7 минут работы дезинтегратора двигатель выключают и через штуцер (27) (рис.23) бактериальной петлей отбирают пробу для проверки полноты разрушения клеток (делают мазок и окрашивают по Граму). При наличии в поле зрения целых клеток операцию повторяют.
При IOOt-ом разрушении клеток (т.е. в поле зрения нет ни одной клетки, окрашенной по Граму положительно) суспензию сливают в тот же стакан, из которого загружали, предварительно его вымыв. Затем суспензию разливают по центрифужным стаканам приблизительно по 60 мл, тщательно уравновешивают на весах и производят центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок в центрифужных стаканах промывают 40 мл (в ка'кдом стакане) дистиллированной воды, перемешивая содержимое в течение 5 минут стеклянной палочкой, и снова центрифугируют при тех же условиях. Надосадочную (промывную ) воду сливают, а осадок в центрифужных стаканах обрабатывают ацетоном, перемешивая стеклянной палочкой, и переносят на коническую воронку с бумажным фильтром. Воронка вставлена в колбу на 200 мл. На воронке осадок промывается ацетоном до тех пор пока не станет рассыпчатым. После этого осадок
Предыдущая << 1 .. 52 53 54 55 56 57 < 58 > 59 60 61 62 63 64 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама