Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 61

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 55 56 57 58 59 60 < 61 > 62 63 64 65 66 67 .. 106 >> Следующая

Определение моносахаридов в клеточной стенке микроорганизмов методом распределительной хроматографии на бумаге.
Метод основан на различней степени распределения моносахаридов между двумя несмешивающимися жидкими фазами (неподвижной водной фазой и подвижной фазой органического растворителя'
Органический растворитель (например, II-бутанол, насыщенный водой), проходя через полоску фильтровальной бумаги,увлекает за собой сахара, раствор которых был нанесен на бумагу.
Различные сахара передвигаются по бумаге с неодинаковей скоростью. .
После распределения на хроматограмме сахара проявжэт проявителем, например, анштичфталатом.
При этом на бумаге появляются пятна рая лично" окраски б результате реакши конденсации с образованием хромогенов к
последующего их окисления:
+

Ф + Н20
Диаминодифенилметановый
хромоген
R
.NH3 Ф
+
н3н-<3-с^О=ш2 Ф
R
окрашенное соединение
где Ф - фталевая кислота r - остаток сахара Альдопентозы дают яркую вишнево-чсрасную окраску,альдогек-созы - неяркую красно-коричневую.
Анилинфталат более чувствителен к альдозам,чем к кетозам. Цель работы.' Определить количественно и качественно моно-сахаридный состав клеточных стенок дрожжей методом распределительной хроматографии на бумаге.
Материалы. Эмалированная кювета,ампула на 10 мл,микропи-петки на0,1мл-3, 2 Н НС1 , порошок ВаСОд, универсальная индикаторная бумага; система растворителей - бутанол:этанол:ам-миак:вода (в соотношении 40:10:1:49,используется верхний слой), проявитель - анилингидрофталат (0,75 мл свежеперегнанного анилина + 1,66 г фталевой кислоты + 100 мл водонасыщенного бута-нола).ледяная уксусная кислота. Свидетели I (смесь равных объемов 4% растворов арабинозы,глюкозы,ксилозы и рибозы); свидетели П (смесь равных объемов 4% растворов галактозы,ман-
259
нозы, фруктозы, фукозы). При таком приготовлении свидетелей Т и
II содержание каждого сахара в смеси составляет 1%.
Ход работы. Навеску клеточных стенок (о мг) гидролизуют в 0,5 мл 2Н HGX в запаянной ампуле в течение 4 часов на кипящей водяной бане. Затем гидролизат клеточных стенок разводят в ампуле в два раза дистиллированной водой и нейтрализуют порошком ВаСОд. Ампулу ставят в центрифужную пластмассовую пробирку и центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин. После центрифугирования надосадочную жидкость наносят на хроматограмму в количестве 0,02 мл. На соседние полоски хроматограммы наносят углеводы - свидетели I и П по 0,ОТ мл. Затем хроматограмму помещают на сутки в хроматографическую банку так, чтобы ее кончики были погружены в систему растворителей - бутанол:этанол: аммиак: вода приблизительно на 10 мм. По истечении суток хроматограмму высушивают и снова помещают в хроматографическую банку (процедуру повторяют трижды). После трехкратного прохождения хроматограммы системой растворителей ее высушивают, смачивают проявителем, снова высушивают и проявляют в сушильном шкафу в течение 5-ТО минут при Т00-Т050. После этого по свидетелям определяют, какие моносахара входят в состав углеводных полимеров клеточных стенок. Затем вырезают пятна выявленных моносахаридов и элюируют 3 мл ледяной уксусной кислоты в пробирках в течение ТО мин. на кипящей водяной бане. Экстинкцию элюатов замеряют на фотоэлектроколориметре против элюата полоски пустой хроматограммы (такого же размера как и вырезанная проба), обработанной анилингидрофталатом, при синем светофильтре в кювете с рабочей длиной 5 мм. Количество моносахаров в элюате определяют по стандартным кривым,
260
а затем пересчитывают на процентное содержание в воздушно-сухой клеточной стенке.
Получение полисахаридного препарата из клеточных стенок микроорганизмов
Извлечение полисахаридных препаратов из клеточной стенки имеет в своей основе два процесса:
1) Разрушение структуры клеточной стенки;
2) Экстракцию полисахаридных препаратов клеточной стенки с последующим осаждением их спиртом или ацетоном.
Для разрушения структуры клеточной стенки могут быть ис-Яочьзованы различные химические агенты. В литературе описано /мменение для этой цели воды, глицерина, диэтиленгликоля, fЬ - нафтола, трихлоруксусной кислоты, фенола, детергентов ,р("9бавленных (0,1 Н) растворов минеральных кислот, растворов ' ^е*очей и др.
В большинстве случаев процесс разрушения структуры клеточной стенки сопровождается экстракцией полисахаридных препаратов т.е. переходом их в водный раствор разрушающего химического агента.
При этом, чем дестче обработка клеточных стенок, тем глубже разрушение их структуры и тем выше выход полисахаридного препарата.
Так при экстракции из клеточных стенок дрожжей полисахаридных препаратов водой при 20°С выход последних составляет %. Обработка ке дрожжевых клеточных стенок 3%-ным водным раствором няОП при позволяет достигнуть выхода полисахаридов I'5-2o"'.s
Т данной работе с целью получения высокого выхода поли-
2GT
сахаридного препарата использован один из наиболее жестких методов - обработка клеточных стенок 3^-ным водным раствором ЯаОН при Т00°С.
Цель работы. Получить полисахаридные препараты из клеток и клеточных структур.
Предыдущая << 1 .. 55 56 57 58 59 60 < 61 > 62 63 64 65 66 67 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама