Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 62

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 56 57 58 59 60 61 < 62 > 63 64 65 66 67 68 .. 106 >> Следующая

Материалы. Магнитная мешалка с подогревом, часовое стекло, диаметром 70 мм, 3% водный раствор ЯаОН, ледяная уксусная кислота, спирт этиловый, эфир серный.
Ход работы. Навеску клеточных стенок 0,5 г помещают в 50 мл химический стакан, приливают 15 мл 3% НаОН и перемешивают магнитной мешалкой с обогревом в течение Т часа при 90-Ю0°С. Содержимое стакана переносят в полиэтиленовые центрифужные стаканы и уравновешивают на весах.'Центрифугируют при 5000об/мин в течение 15 мин. Затем надосадочную жидкость осторожно сливают в Т50 мл химический стакан, а осадок клеточных стенок промывают 15 мл дистиллированной водой, снова центрифугируют при тех же условиях. Промывную воду приливают к щелочному экстракту в 150 мл стакан. Экстракт и промывные воды нейтрализуют ледяной уксусной кислотой. Полисахаридный препарат осаждают из экстракта добавлением 4-х объемов этитового спирта. Выпавший осадок переносят на коническую воронку с бумажным фильтром, промывают на воронке 3 раза спиртом по 10 мл и 2 раза эфиром по ТО мл, переносят на часовое стекло и сушат при температуре 40° Т час. Полученный препарат Езвешивают и расчитывают его выход в процентах от.биомассы воздушно-сухих клеточных стенок.
Делают реакцию с фенол-серной киолото"' для выявления я препарате углеводов.
Гель-хроматограсЬия полисахаридного препарата.
Иель работы. Освоить метод гель-хроматографии для аналитических и препаративных целей.
Материалы. Хроматографическая колонка (с внутренним диаметром 8 мм, высотой 200 мм), штатив для хроматографической колонки,коллектор для отбора фракций с колонки,напорная склянка на 200 мл, сефадекс G -200 в I/I5 М фосфатном буфере (рН=6,6), I/I5 М фосфатный буфер, о% водный раствор фенола, концентрированная H^so^.
Ход работы. Хроматографическую колонку заполняют сефадек-сом G-200, набухшим (в течение трех суток) в I/I5 М фосфатном буфере. Дают возможность гелю осесть (над гелем должно остаться около 3 мл буфера). Колонку с-гелем промывают,пропуская через нее из напорной склянки I/I5 М фосфатный буфер (промывку ведут до тех пор,пока во взятой пробе не будет отрицательная реакция с фенолсерной кислотой).
Навеску полисахаридного препарата (3 мг) растворяют в 0,3-
0,5 мл I/I5 М фосфатного буфера,рН=6,б. После растворения полисахарида раствор центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 минут. Жидкость отсасывают пастеровской пипеткой и осторожно наслаивают на поверхность геля. Для этого предварительно избыток буфера пастеровской пипеткой удаляют из колонки почти полностью, остатку дают впитаться в гель и в один прием осторожно наносят пипеткой раствор полисахаридного препарата на поверхность геля. После того как раствор впитается, поверхность геля заливают буфером из пипетки (3 мл) и начинают подавать буфер (элюирующую жидкость) из напорной склянки, в этот же момент начинают отбор фракций.Фракции собирают по 0,5 мл в
263
40 пробирок. С каждой пробой ставят реакцию с фенолеерной кислотой. Для-этого в каждую пробирку добавляют 0,5 мл 5$ фенола и 2,5 мл концентрированной серной кислоты.После охлаждения пробирок до комнатной температуры замеряют экстинкцию на фотоэлектроколориметре при синем -светофильтре и кюветой с рабочей длиной
5 мм.
е
Строят кривую зависимости поглощения света от вышедшего с колонки объема элюата,откладывая по оси абсцисс вышедшие с колонки объемы. По построенной кривой определяют число фракций в полисахаридном препарате, различающиеся по молекулярной массе.
8.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ГЛИКО-ПРОТЕИНОВОГО КОМПЛЕКСА ИЗ ДРОЖЖЕЙ И ЕГО АНАЛИЗ.
Вопросы для подготовки по теме
1. Получение глико-протеинового комплекса из дрожжей.
2. Качественные реакции на белки.
3. Определение аминокислотного состава глико-протеино-вого комплекса.
4. Электрофоретический анализ полисахаридов,белков и глико-протеинов.
Получение глико-протеинового комплекса из дрожжей
Цель работы. Изолировать глико-протеиновый комплекс из дрожжевых клеток и изучить его состав.
Ход работы. Навеску воздушно-сухих дрожжевых клеток (Юг) помещают в 200 мл стакан,заливают 160 мл дистиллированной воды и, перемешивая стеклянной палочкой,готовят однородную суспензию микроорганизмов. Затем суспензию дрожжей подвергают раз рушению в дезинтеграторе по методике,описанной ранее (см.По-
лучение клеточных стенок). После дезинтеграции суспензию разливают в центрифужные пробирки, уравновешивают их на.весах и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 минут. Надосадочную жидкость осторожно сливают в химический стакан на 500 мл и прибавляют к ней 3 объема 96% этанола, перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на I час в холодильнике. После формирования осадка гликопротеинового комплекса (в данном случае получается гликопротеиновый комплекс с примесями других биополимеров, не подвергающийся дальнейшей очистке). Надосадочную жидкость сливают. Осадок переносят в чистую чашку Петри и высушивают в сушильном шкафу при 40°С в течение I часа.
Качественное определение углеводного компонента в гчикопротеиновом комплексе (реакция Нодобедова-Молииа).
Химизм реакции аналогичен реакции с фенол-серной кислотой.
Предыдущая << 1 .. 56 57 58 59 60 61 < 62 > 63 64 65 66 67 68 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама