Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 63

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 57 58 59 60 61 62 < 63 > 64 65 66 67 68 69 .. 106 >> Следующая

Материалы. Т0^-ный спиртовый раствор ^-нафтола.
. Ход работы. Берут 3 мг гликопротеинового комплекса и помещают в пробирку с Т мл дистиллированной воды. Встряхивая или растирая стеклянной палочкой, добиваются наиболее полного растворения комплекса. Затем к раствору прибавляют 2 капли 10* спиртового раствора "L- нафтола и 3 мл концентрированной 'осторожно по стенке пробирки, чтобы кислота не смешивалась с, •шдкостыо, а опускалась па дно). Реакция положительная если :ia границе жидкостей образуется кольцо фиолетового цвета.
Качественное определение протеинового компонента в гликопротеиновом комплексе (биуретовая реакция)
Эту реакцию дают все белки, а также продукты их неполного гидролиза - пептоны,пептиды,содержащие не менее двух пептидных связей. Группа,образующая пептидную связь (-со-кн-),в щелочной среде присутствует в своей таутомерной енольной форме:
При избытке щелочи происходит диссоциация -ОН группы,появляется отрицательный заряд,с помощью которого кислород взаимодействует с медью,возникает солеобразная связь;кроме того, медь образует дополнительные координационные связи с атомами азота,участвующими в пептидной связи,путем использования их неподеленных электронных пар. Возникающий таким образом комплекс очень стабилен. Цвет комплекса фиолетовый с красным или синим оттенком.
Такую же реакцию дают с солями меди в щелочной среде биурет (NHg- со-та-со-кн2),оксамид ( н^т- со-со-нн2)
Таким образом,реакция не является строго специфичной для полипептидных цепей.
Материалы.10% водный раствор КаОН ,1% водный раствор СиЭОд Ход работы.Взвешивают 3 мг гликопротеинового комплекса
о н
он
II
-с - н-
- C = N-
гистидин
треонин (сну-снон-сн-соон),серин ( но-*-сн2-сн-соон) и
аспарагин н2тг - с -сн2-сн - соон
о
NH,
2
266
и растворяют в I мл дистиллированной воды в пробирке.Затем добавляют I мл 10% раствора NaOH и 2 капли раствора CuSO^ Взбалтывают. При наличии в пробе протеинового компонента появляется фиолетовое окрашивание.
Определение аминокислотного состава гликопротеинового комплекса методом распределительной хроматографии на
бумаге
Механизм разделения аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге аналогичен хроматографическому методу анализа углеводов,о котором говорилось ранее.
Химизм же реакции обнаружения аминокислот на хроматограмме сводится к следующему.
При нагревании нингидрина с аминокислотами последние окисляются и распадаются,образуя двуокись углерода,аммиак и соответствующий альдегид:
Л /ОН Л)
R-СН-CZ + I X ->R-+ CO,+NH, +
j ^он Ч/Ч/ он *4
HHg 0 6
-аминокислота окисленный альдегид восстановлен-
нингидрин ный нингидрин
Восстановленный нингидрин конденсируется с аммиаком и окисленной молекулой нингидрина,образуя краситель типа мурек-
сида фиолетово-синего цвета:
О О О ONH.
4
НО , ^
+ 2 ?Ш3+
0 О
окрашенный продукт
конденсации
257
Следует иметь в виду, что аммиак и р-аланин также дают положительную нингидриновую реакцию. Чувствительность нингид-риновой реакции может быть повышена добавлением аскорбиновой кислоты.
Материалы. Ампула на 10 мл.микропипетка на 0,1 мл,эмалированная ванночка,универсальная индикаторная бумага,6Н НС1 , 10% изопропиловый спирт,система растворителей - Н-бутанол:ук-сусная кислота:вода - 4:1:5; свидетель I (смесь: цистина,лизина, аспарагиновой кислоты,глутаминовой кислоты,тирозина,фенилаланина. - 0,1 М раствор в 10% изопропиловом спирте,подкисленном соляной кислотой),свидетель II (смесь: оерина,треонина, пролина,метионина,лейцина - 0,1 М раствор в 10% изопропиловом спирте,подкисленном соляной кислотой ), свидетель III (смесь: аргинина,глицина, "с-аланина,валина - 0,1 М раствор в Ш?о изопропиловом спирте,подкисленном соляной кислотой), 0,5% раствор нингидрина в ацетоне.
Ход работы. Навеску гликопротеинового комплекса (20 мг) гидролизуют 6Н НС1 (5 мл) в запаянной ампуле на кипящей бане в течение 20 часов. По окончании процесса гидролиза содержимое ампулы переносят в химический стакан на 100 мл и упаривают на водяной бане. Упаренный гидролизат растворяют в 5 мл теплой дистиллированной воды,фильтруют через бумажный фильтр и вновь упаривают. Такую процедуру продолжают до теч пор;пока реакция гидролизата не станет нейтральной (pH определяют, используя универсальную индикаторную бумажку). Затем осадок хлоргидра-тов аминокислот растворяют в I мл 10% изопропилового спирта и наносят микропипеткой 0,02 мл полученного раствора на подготов-
268
ленную хроматограмму. Параллельно на соседние полоски хроматограммы наносят свидетели 1,П и Ш по 0,02 мл.
Нанесенные капли высушивают на воздухе и хроматограмму помещают в хроматографическую камеру,погрузив ее кончики на 10 мм в систему растворителей; верхний конец хроматограммы закрепляют на перекладине. Камеру плотно закрывают и оставляют на 18-20 часов при комнатной температуре для распределения смеси аминокислот. Затем хроматограмму вынимают из камеры,высушивают на воздухе в вытяжном шкафу и снова помещают в хроматографическую камеру в систему растворителей на 18-20 часов. Эту процедуру повторяют трижды.
Предыдущая << 1 .. 57 58 59 60 61 62 < 63 > 64 65 66 67 68 69 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама