Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 64

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 58 59 60 61 62 63 < 64 > 65 66 67 68 69 70 .. 106 >> Следующая

После трехкратного пропускания растворителей хроматограмму высушивают и проявляют - для этого смачивают ее в эмалированной ванночке 0,5^ раствором нингидрина в ацетоне,высушивают под тягой и выдерживают в сушильном шкафу при 75-80° в течение 15 минут.
Полученные окрашенные пятна сравнивают с пятнами,которые дали свидетели и определяют качественно аминокислотный состав гликопротеинового комплекса.
Электрофоретический анализ полисахаридов. белков и гликопротеинов.
Материалы. Аппарат для электрофореза, эмалированная кювета,микропипетка на 0,2 мл,60^ водный ацетон, 1% водный раствор йодной кислоты,фуксинсерная кислота (которую готовят растворением I г основного фуксина в I л дистиллированной воды при 60°С, добавлением 6 г метабисульфита калия и 10 мл конпен-
259
триров'анной НС1 , выдержкой реактива в холодильнике в течение суток; в случае недостаточного обесцвечивания реактива, его обрабатывают 3 г активированного угля и фильтруют через бумажный фильтр).раствор метабисульфита калия (8 г в I литре воды), концентрированная соляная кислота,раствор бромфенолового синего (который готовят растворением 0,5 г растворимого бромфенолового синего, 10 г сулемы и 50 мл уксусной кислоты в I л дистиллированной воды), 0,5^ раствор уксусной кислоты.боратный буфер (рН=9,30).
Ход работы. Взвешивают 10 мг исследуемого препарата и растворяют в I мл дистиллированной воды (в случае плохой растворимости в воде препарат растворяют в боратном буфере) в пробирке. На расстоянии 20 см от катодного края на одну полоску хроматографической бумаги микропипеткой наносят 0,1 мл раствора препарата на другую 0,3 мл. (нанесение раствора выполнять тонким штрихом,перпендикулярным к полоске). Обе полоски помещают в прибор для электрофореза. Электрофорез проводят в боратном буфере (рН=9,3) при раг/ности потенциалов 300 В в течение 3-х часов.
Нейтральные полисахариды могут давать комплексы с борат-ным буфером и приобретать таким образом заряд,который будет вызывать движение молекул в электрическом поле.
По окончании процесса элекрофореза бумажные полоски высушивают на воздухе, а затем фиксируют в сушильном шкафу при 115° в течение 20 минут.
Первую фореграмму окрашивают фуксинсерной кислотои на выявление полисахаридов, вторую - бромфеноловым синим на выявление белка.
270
а) Окраска на выявление полисахаридов.
1. Первую фореграмму обрабатывают в эмалированной кювете 60^ водным ацетоном в течение 10 минут.
2. Высушивают на воздухе.
3. Обрабатывают 1% водным раствором йодной кислоты в течение 45 минут.
4. Промывают 3 раза дистиллированной водой.
5. Обрабатывают в течение 10 минут фуксинсерной кислотой.
6. Обрабатывают 3-4 раза раствором метабисульфита калия по нескольку секунд (к раствору метабисульфита перед употреблением добавляют концентрированную соляную кислоту из расчета
12 мл на I л).
7. Фореграмму погружают на 10 минут в 60% водный раствор ацетона и высушивают на воздухе.
Фракции,содержащие полисахарид, на полоске бумаги окрашиваются в красно-фиолетовый цвет.
б) Окраска на выявление белка.
1. Вторую фореграмму обрабатывают раствором бромфенолового синего в течение 30 минут.
2. Обрабатывают 3-4 раза уксусной кислотой по 15 минут каждый раз и высушивают на воздухе.
Фракции,содержащие протеины,окрашиваются на полоске бумаги в светло-зеленый или синий цвет.
Делают заключение о количестве полисахаридных и белковых фракций.
Зсли имеются полосы,окрашенные в красно-фиолетовый цвет на первой -^орегрлмме, в светло-зеленый цвет на второй фореграм-
ме и одинаково удаленные от линии старта, то можно сделать предварительное заключение, что эти полосы соответствуют фракциям, являющимися гликопротеинами.
8.3. ПОЛУЧЕНИЕ ДНК И ИССЛЕДОВАНИЕ ЕЕ СВОЙСТВ.
Вопросы для подготовки по теме
Т. Химический состав и строение ДНК.
2. Топология и функции ДНК у микроорганизмов.
3. Характеристика препаратов ДНК.
4. Методы выделения ДНК из микробной клетки.
Нуклеиновым кислотам принадлежит ведущая роль в осуществлении специфического биосинтеза макромолекул, обеспечении процессов морфогенеза и передачи наследственной информации.
Молекулы ДНК построены из четырех основных мононуклеотид-ных единиц, ковалентно связанных между собой с помощью фосфо-эфирных мостиков, соединяющих 3 положение одного мононуклеоти-да с 5:-положением его соседа. В состав ДНК входят азотистые основания: аденин,гуанин,тимин и цитозин.
Как правило, каждая молекула ДНК имеет одинаковый качественный состав. Однако конфигурация молекул разных ДНК может значительно различаться.
По структуре она представляет собой линейный полинуклеотид, состоящий из двух нитей. Каждая из этих нитей удерживается одна возле другой водородными связями и вся двухцепочечная структура закручена в правую спираль.
Препараты ДНК, выделенные из разных организмов, различаются по молекулярной массе, соотношению и последовательности мо-
272
нонуклеотидных единиц.
У прокариот, содержащих только одну хромосому, практически вся ДНК присутствует в виде одной макромолекулы с молекуляр-
Q
ной массой более 2*10 . У эукариот, содержащих несколько хромосом, имеется много молекул ДНК так же с большой молекулярной массой.
Предыдущая << 1 .. 58 59 60 61 62 63 < 64 > 65 66 67 68 69 70 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама