Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 65

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 59 60 61 62 63 64 < 65 > 66 67 68 69 70 71 .. 106 >> Следующая

Нуклеотидный состав ДНК у различных видов различен, а у организма данного вида он не зависит от его возраста, условий питания и внешней среды. ДНК близких видов имеют сходный нуклеотидный состав, тогда как эволюционно отдаленные организмы, как правило, заметно отличаются один от другого по этому признаку.
Для изучения природы и свойств нуклеиновой кислоты необходимо ее выделить, по возможности в нативном неизменном состоянии. Но это трудно сделать,т.к. крупные молекулы нуклеиновых кислот прочно связаны с другими химическими компонентами клетки, особенно с белками, а кроме того в клетке всегда есть активные нуклеазы, заключенные преимущественно в лизосомах и переходящие в свободное состояние при гомогенизации тканей. Таким образом, при выделении нуклеиновых кислот необходимо особое внимание уделять инактивации нуклеаз,полноте гомогенизации и очистке препарата от белков, полисахаридов,полифосфатов.
В настоящее время существует несколько методов выделения ДНК. Для разрушения клеток используют механические методы (дезинтеграция), химические (с помощью детергентоЕ^ферментные (с помощью лизоцима). Для экстракции ДНК применяют фенол, перхлорат натрия, солевые растворы. В полученных препаратах ДНК определяют содержание примесей (белков,полисахаридов,полифос-
фатов и др.), а так^же исследуют степень ее полимерности и на-тивности, для этого измеряют вязкость, гиперхромный эффект и коэффициент седиментации препарата.
Т. Кислотно-основные свойства ДНК.
ДНК - это довольно сильная многоосновная кислота, полностью ионизованная при любом значении pH выше 4. Фосфатные группы, расположенные на периферии двойной спирали, полностью доступны для воды. Они прочно связывают двухвалентные катионы, как Са^+ и М g* , а так^же поликатионные амины - спермин и спермидин.
ДНК прочно связывается с гистонами - основными ое^пами, входящими в состав хромосом эукариотических клеток. Пары оснований наиболее устойчивы при значении рН=4-И. За пределами этого интервала значений pH двухцепочечная спираль ДНК постепенно теряет устойчивость и раскручивается.
2.Вязкость
Визкозиметрические методы используют для исследования процессов денатурации молекулы ДНК. Для работы следует брать растворы очень низкой концентрации, т.к. в процессе диффузии молекулы ДНК увлекают с собой большой объем раствора, в несколько раз превышающий собственный объем молекулы; поэтому раствор ДНК может рассматриваться как "идеальный" только при очень низких концентрациях.
3. Седиментадионные свойства.
Константа седиментации служит для определения молекулярной массы. Коэффициент седиментации и молекулярную маосу ДНК можно определить, используя обычные методы ультрацентрифугиро-
274
вания. Коэффициенты седиментации исследуемых препаратов ДНК часто определяют, сравнивая скорости седиментации анализируемого препарата ДНК и препарата ДНК с заранее известным коэффициентом седиментации. По ширине равновесной полосы ДНК в градиенте CsCL можно судить о ее молекулярной массе.
4. Денатурация ДНК
При определенных условиях двухцепочечная ДНК может раскручиваться с образованием неупорядоченных клубков. Такой структурный переход происходит: I) при экстремальных значениях pH;
2) при нагревании; 3) при уменьшении диэлектрической постоянной водной среды в результате добавления спиртов, кетонов и т.д.
4) при обработке амидами карбоновых кислот, мочевинои и другими аналогичными веществами. Такой процесс перехода "спираль-клубок" был назван денатурацией.
Денатурация ДНК сопровождается резкими изменениями ее физических свойств: 1) уменьшается вязкость; 2) возрастает поглощение света при 260 нм; 3) увеличивается отрицательный угол вращения плоскости поляризации. Из всех физических свойств удобнее всего использовать в качестве критерия денатурации ДНК возрастание поглощения света при 260 нм, называемое гиперхром-ным эффектом.
Известно, что в ультрафиолетовой области спектра ДНК поглощает у/ф лучи с максимумом при 260 нм приблизительно на 40^ меньше, чем смесь нуклеотидов, характерная для данного образца ДНК. При денатурации ДНК водородные связи, стабилизирующие азотистые основания в определенном положении, разрушаются, что приводит к увеличению поглощения в ультрафиолетовой области
275
спектра, равному при максимальном нарушении структуры ДНК 40% по сравнению с ее нативными образцами.
Таким образом, величина поглощения (sp ) на I моль фосфора ДНК при стандартной ширине кюветы (I см) может служить одним из критериев нативности ДНК. Нативные образцы ДНК имеют Ер=6200 - 6600. Более высокие значения Ер характеризуют дена-турационные сдвиги в структуре ДНК.
Цель работы - выделить ДНК бактериальной клетки, доказать ее идентичность и оценить степень чистоты и нативности.
Материалы. Культуру E.coli выращивают на чашках Петри с ММ 48 часов при t =37°. Биомассу собирают стерильным шпателем.
Для исследования требуется не менее 4 г сырой биомассы.
Реактивы: 1) 0,1 мц aCi в 0,014 м растворе цитрата На -500 мл;
2) 2 мНаС1- ТОО мл; '
3) 0,2 MuaCl- ТО мл;
4) Хлороформ - изоамиловый спирт (24:1 по объему)
Предыдущая << 1 .. 59 60 61 62 63 64 < 65 > 66 67 68 69 70 71 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама