Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 68

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 62 63 64 65 66 67 < 68 > 69 70 71 72 73 74 .. 106 >> Следующая

5. Микробные пигменты как компоненты ферментативных
реакций
6. Свечение у микроорганизмов как ферментативный процесс
Получение Ферментных препаратов
Микроорганизмы являются богатейшим источником различных ферментных препаратов, в том числе производящихся в промышленном масштабе. Ввиду того, что ферменты являются белками и легко подвергаются денатурации, все операции по их выделению и очистке следует вести в мягких условиях, при пониженной температуре, применяя высокоочищенные реактивы. В связи с тем, что выделение индивидуальных ферментов чрезвычайно сложно, часто работу ведут с частично очищенными ферментными препаратами. Источни-• ком экзоферментов микроорганизмов может служить культуральная ?
жидкость, освобоженная от клеток фильтрацией или центрифугированием; источником эндоферментов - микробные клетки, которые в целях консервации обезвоживают. Обезвоживание используют тепловое или водоотнимающими реактивами (ацетоновые порошки). Обезвоживание способствует повышению проницаемости клеточной стенки, что необходимо для извлечения эндофермента. Для этой же
285
цели применяют механическую дезинтеграцию живых или высушенных -клеток, повторное замораживание и оттаивание и автолиз.
Для выделения ферментов из культуральной жидкости или из клеточных экстрактов используют осаждение с помощью высаливания сульфатом аммония, или органическими растворителями. Для получения чистых препаратов используют такие эффективные методы, как электрофорез, гель-хроматографию, ионообменную хроматографию и др.
Получение препарата сахаразы
(j3-D- фруктофуранозид-фруктогидролаза, КФ 3.2.1.26)
Материалы. Дрожжи пекарские, кварцевый песок, жидкость Фелинга, Ъ% раствор сахарозы, ацетон.
Влажные дрожжи тщательно растирают в течение 15 мин в ступке с кварцевым песком. Растертую массу наносят тонким слоем на |текло и высушивают в токе сухого воздуха. Высушенные дрожжи растирают в порошок. Для извлечения сахаразы к полученному порошку приливают небольшими порциями воду из расчета 10 мл на I г сухой массы. Воду добавляют при постоянном перевешивании, полученную массу вновь растирают в ступке и центрифугируют при 3000 об/мин, или фильтруют через бумажный складчатый фильтр. К полученному фильтрату добавляют пятикратный объем охлажденного ацетона, образовавшийся осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин, высушивают при 37° и растирают в порошок. Полученный препарат длительно сохраняется.
В качестве антисептика к нему можно добавить кристаллик тимола, завернутый в фильтровальную бумагу.
Для проверки активности сахаразы готовят 0,01% водный раствор полученного препарата и наливают по 0,5 мл в две про-
286
бирки. В одной из них фермент инактивируют кипячением в течение i 3 мин, затем пробирку охлаждают. В обе пробирки добавляют по
3 мл Ъ% раствора сахарозы и выдерживают при 40° 10-15 мин. Затем в пробирки добавляют по 2 мл жидкости Фелинга, перемешивают и нагревают до начала кипения. В пробирке с активным ферментом появляется красный осадок окиси меди (I), что указывает на присутствие восстанавливающих ионы меди глюкозы и фруктозы, образующихся из невосстанавливающего её дисахарида - сахарозы.
В контрольной пробирке окиси меди не образуется.
Получение препарата амилазы из плесневых грибов.
Материалы. Среда Чапека, культура Aspergillus iri^er , образующая амилазу.
Культивирование при 25-28° 5-6 дней.
Получение Фермента. Грибную массу отделяют фильтрованием , высушивают в тонком слое на поверхности стекла при 37° . Воздушно-сухую массу растирают в фарфоровой ступке с кварцевым песком. 2 г полученного порошка смешивают с 50 мл воды при 37°, тщательно размешивают и настаивают в течение 2 час при этой же температуре, затем отфильтровывают. В фильтрате содержится комплекс грибных амилаз.
Определение активности Фешента.
Смешивают 1 мл полученного фильтрата с 2 мл Й раствора крахмала. Каплю смеси с помощью стеклянной палочки помещают на фарфоровую пластинку. К ней добавляют каплю раствора Люголя. Наблюдают интенсивно синее окрашивание. Пробирку помещают в водяную баню при 40° и через каждые 2 мин повторяют взятие проб. По мере расщепления крахмала пробы с йодом будут окрашиваться в различные цвета вследствие образования декстринов
287
разной степени сложности. Амилаза, присутствующая в крахмале, дает синее окрашивание с йодом (м.м. до 500000), амилодекстри-ны - сине-фиолетовое (м.м. около 10000), эритродекстрины -красно-бурое (м.м. 4000-6000). Декстрины, имеющие низкий молекулярный вес , не окрашиваются йодом.
Результаты вносят в таблицу.
Гидролиз крахмала грибной амилазой
.Время гидролиза Окрашивание пробы Продукты гидролиза
0 2 мин и т.д. синее 1 -
Качественное определение Ферментов
Каталаза. Это фермент, катализирующий разложение перекиси водорода на воду и кислород. Каталаза содержится у аэробов и факультативных анаэробов, не содержится у облигатных анаэробов. Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться сразу же после смешивания микробных клеток с 1% раствором HgOg. На предметное стекло помещают каплю перекиси водорода и суспензируют в ней петлю микробной культуры, выращенной на плотной среде. Отмечают, какой из изучаемых мшгроор-ганизмов образует каталазу.
Предыдущая << 1 .. 62 63 64 65 66 67 < 68 > 69 70 71 72 73 74 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама