Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 69

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 63 64 65 66 67 68 < 69 > 70 71 72 73 74 75 .. 106 >> Следующая

ГлУтамат-аминотранссЬераз а. Этот фермент катализирует пере-аминирование глутаминовой кислоты с пировиноградной кислотой с образованием аланина:
H00C-CH2-CH2-CH-C00H + CHgCCOOH CHgCHGOOH + Н00С-СН2-СН2-СС00Н лГHg 0 '^нх О
глутаминовая к-та пировиноград- аланин <Л-кетоглутаровая ная к-та • к-та
288
Материалы. Оборудование и реактивы, необходимые для хроматографического анализа аминокислот, 1% растворы глутаминовой и пировиноградной кислот, нейтрализованные кристаллическим гидрокарбонатом натрия, 2$ уксусная кислота. Источником фермента служит густая суспензия микробных клеток. Для ее получения микроорганизм выращивают на соответствующей питательной среде, клетки собирают, промывают физиологическим раствором при центрифугировании, затем добавляют к осадку в центрифужных пробирках равный объем физиологического раствора и тщательно перемешивают.
Ход определения. В две пробирки берут по 0,5 мл растворов глутаминовой и пировиноградной кислот и вносят по I мл свежей микробной взвеси. Одну (контрольную) пробу сразу же прогревают на кипящей водяной бане 1-2 мин. Затем обе пробирки оставляют при 37° на 2 часа. После инкубации в каждую пробирку добавляют по 0,25 мл уксусной кислоты и фильтруют. На полоски хроматографической бумаги наносят по 0,01-0,02 мл фильтрата.
В качестве свидетелей используют глутаминовую кислоту и аланин. Проявление хроматограммы ведут в течение 24 час, затем её сушат и окрашивают раствором нингидрина. Отмечают убыль глутаминовой кислоты в опыте по сравнению с контролем и появление аланина.
ДисЬсЬузионный метод определения Ферментов
Этот метод является экспрессным и может быть использован для поиска активных продуцентов ферментов в природных популяциях микроорганизмов.
Принцип метода. Горячий (80-90°С) 3% раствор агар-агара смешивают с равным объемом раствора субстрата, перемешивают и
289
разливает в чашки Петри. После застывания агара в нем делают лунки, в которые вносят раствор фермента. В качестве последнего обычно используют культуральную жидкость испытуемого микроорганизма. Чашки выдерживают 18 час при 37°, затем выявляют и измеряют зоны превращенного субстрата.
Амилаза
Субстрат: Т,б?6 раствор крахмала кипятят 3 мин при перемешивании. Полученный раствор смешивают с равным объемом ацетатного буфера pH 5,0 содержащего VaCf/ 0,4 м буфер и 0,4 м раствор jTaCl в равных объемах/.
Окрашивание раствором Люголя I мин.
Об активности фермента судят по образованию неокрашенной зоны вокруг лунки за счет гидролиза крахмала.
Протеаза
Субстраты:
а) Казеин по Гаммерстену. Готовят 1% раствор на I/I5 м фосфатном буфере pH 7,6, нагревая на кипящей водяной бане 10 мин при перемешивании. В качестве консерванта добавляют фенол до конечной концентрации 0,2%.
Окрашивание Tfo раствором амидового черного на 7% растворе уксусной кислоты 5-7 мин. Об активности фермента судят по образованию зоны просветления вокруг лунки.
б) Гемоглобин. Раствор, содержащий 10 мл 22% гемоглобина, 8 мл I н ЛаОН, 82 мл воды и 36 г мочевины выдерживают при 25° 60 мин. Затем в него вносят 10 мл I м раствора KHgPO^, 4 г мочевины и доводят объем до 220 мл. Перед работой раствор смешивают с равным объемом фосфатного буфера 0,2 м, pH 7,6.
290
Окрашивание не требуется, об активности фермента судят по зоне измененного гемоглобина.
Липаза
Субстрат: 0,2 м фосфатный буфер pH 7,6 смешивают с равным объемом горячего агар-агара, добавляют 0,1% подсолнечного масла, перемешивают I мин в гомогенизаторе и разливают в чашки.
Об активности фермента судят по образованию зоны просветления вокруг лунки за счет гидролиза масла.
Влияние на Ферменты температуры. pH. активаторов и ингибиторов.
Т. Влияние температуры на активность амилазы микроорганизмов.
Материалы. Препарат а*илазы ^sp.ni^er или Вас. subtilis. Концентрацию раствора ферментов предварительно подбирают таким образом, чтобы в,условиях опыта полный гидролиз крахмала проходил в течение T0-I2 мин. Раствор крахмала 0,5^; раствор Люго-ля; фарфоровая пластинка; стеклянные палочки; пробирки; пипетки; водяная баня; ацетатный буферный раствор 0,1 н pH 5,0.
Ход работы. В четыре пробирки налить по I мл буферного раствора и по 0,5 мл раствора крахмала. Одну пробирку поставить в водяную баню при 60°, вторую - при 40°, 3-ю при комнатной температуре и 4-ю - в ледяную воду. Через 10 мин, когда содержимое пробирок примет заданную температуру, во все пробирки вносят по 0,5 мл раствора фермента, перемешивают и оставляют в тех же условиях. Наблюдение за ходом гидролиза крахмала ведут по реакции с йодом. Для этого наносят на фарфоровую пластинку несколько капель раствора Люголя и смешивают их с каплями
291
гидролизуемой смеси из каждой пробирки, беря пробы через 1,2,4, 6,8,10 и 12 мин. Результаты наблюдений вносят в таблицу. Делают вывод о величине температурного оптимума для микробной амилазы.
Влияние температуры на скорость гидролиза крахмала
амилазой
Температура Реакция с иодом по истечении времени (в мин)
I 2 4 6 8 10 12
60°
40°
20°

2. Влияние pH на активность амилазы микроорганизмов
Предыдущая << 1 .. 63 64 65 66 67 68 < 69 > 70 71 72 73 74 75 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама