Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 77

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 71 72 73 74 75 76 < 77 > 78 79 80 81 82 83 .. 106 >> Следующая

Вариант опыта Разведение Количество колоний на чашке Кол-во живых клеток в 1мл Выживаемость в %
I 100
2
3 100
4
319
По результатам подсчетов определяют летальный эффект.
Для определения процентного содержания аукеотрофов 100 колоний каждого из вариантов опыта проверяют на способность к росту на минимальной среде. Для этого каждую из 100 колоний высевают штрихом на две чашки: с минимальным и полноценным агаром. Колонии аукеотрофов выявляют по отсутствию роста на минимальной среде.
Для этой же цели можно воспользоваться методом реплик, который позволяет перенести на чашку сразу большое количество колоний.
Метод реплик заключается в переносе или отпечатке бактериальных колоний, развившихся на чашке с твердой питательной средой на другие чашки, при этом точно фиксируют место каждой колонии на первой чашке с питательной средой. Отпечатки делают с помощью лоскута стерильного бархата, натянутого на цилиндрическую деревянную или металлическую подставку, диаметром немного меньше диаметра чашки Петри, на которой нужно сделать отпечаток. Приготовленную таким образом "печать" слегка прижимают к колониям, выросшим на исходной чашке, и делают с нее отпечаток, причем каждая ворсинка бархата становится как бы иглой для переноса бактерий. Затем ворсистый лоскут с отпечатанными на нем колониями бактерий осторожно прижимают к поверхности питательного агара, разлитого в ^ашки Петри (в нашем опыте одна чашка с полноценной питательной средой, а другая
- с минимальной). Чашка с полноценной средой служит в качестве контроля полноты переноса колоний с исходной чашки на аналогичную питательную среду. На минимальном агаре будут образовывать колонии только клетки-прототрофы. Отсутствие определен-
320
ной колонии на минимальном агаре показывает, что соответствующая колония на полноценной питательной среде состоит из аук-сотрофньгх мутантов.
Определение содержания ауксотрофных мутантов в разных
вариантах опыта. Идентификация ауксотроДюв.
Через 24 часа просматривают чашки и определяют долю аук-сотрофов в каждом из четырех вариантов опыта. Результаты вносят в таблицу.
Определение количества ауксотрофных мутантов E.colL в раз-
ных вариантах опыта
Вариант Общее количество Кол-во ауксотрофных колоний
опыта колоний абсолютное % к оощему числу коло ний
Т 2
3
Для идентификации ауксотрофов из второго варианта опыта отбирают ТО колоний, которые высевают штрихами на чашки Петри с минимальной средой, содержащей различные комбинации ростовых веществ (всего таких комбинаций Т2). Таким образом, каждый мутант высевают на Т2 чашек, содержащих перечисленные комбинации веществ (см. таблицу).На каждую чашку по секторам высевают ТО идентифицируемых мутантов. Через 48 часов просматривают чашки. Специфические потребности вьщеленных мутантов определяют следующим образом: если мутант растет только при добавлении к среде двух каких-либо комбинаций веществ, то он нуждается в метаболите, общем для этих групп. Не исключено, что выделен-
32 Т
ные ауксотрофы могут быть дефектны не по одному, а по нескольким метаболитам.
Комбинации ростовых веществ, используемых для идентификации аукеотрофов
Комби нации :- I 2 3 4 5 6
7 аденин биотин фенилаланин аланин аргинин лейцин
8 гипоксантин фолиевая к-та серин цистеин орнитин глицин
9 цитозин пантотен. к-та трипто- фан треонин аспарагин . к-та изолейцин
10 гуанин пиридоксин тирозин тиосуль- пролин фат Уа. гистидин
тт тимин тиамин ПАБК метионин глута- лизин мин.к-та
12 урацил рибофлавин никотин. к-та холин инозит валин
Летальное и мутагенное действие ультрафиолетовых
лучей (УФЛ) на клетки дрожжевых организмов
Наибольший летальный и мутагенный эффект УФЛ наблюдается при длине волны 260 нм, поскольку это максимум поглощения УФЛ ДНК. При изучении зависимости выживаемости бактериальных клеток от дозы УФЛ следует учитывать ряд факторов, влияющих на интенсивность облучения. Прежде всего это густота облучаемой суспензии. УФЛ интенсивно поглощаются клетками, поэтому при большой густоте облучаемой суспензии клетки экранируют друг друга. Это обстоятельство не играет существенной роли при кон-
О
центрациях суспензии, не превышающих Т * ТО клеток/мл. При необходимости использования более густой суспензии ее необходи-
322
мо непрерывно перемешивать во время облучения.
Выживаемость клеток зависит и от состава среды, используемой для суспензирования. Лучше проводить облучение в буферных растворах. Питательный бульон поглощает УФЛ сильнее, чем буферные растворы, поэтому получаемая клетками доза УФЛ уменьша-
*
ется. Но при облучении бульона образуются токсичные органические перекиси, увеличивающие летальный эффект УФЛ.
Наконец, летальный эффект УФЛ зависит от физиологического состояния клеток, в первую очередь от возраста культуры. В стадии экспоненциального роста клетки более чувствительны к УФЛ, чем в стационарной фазе.
Пель работы - получение под действием УФЛ мутантов дрожжевых организмов и определение мутагенного и летального действия УФЛ. Оценка мутагенного действия проводится по выявлению морфологических мутантов, т.е. по количеству морфологически измененных колоний у облученной культуры по сравнению с исходной.
Предыдущая << 1 .. 71 72 73 74 75 76 < 77 > 78 79 80 81 82 83 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама