Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 78

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 72 73 74 75 76 77 < 78 > 79 80 81 82 83 84 .. 106 >> Следующая

Материалы.
Питательная среда - сусло-агар.
Тест культура - клоновая культура одного из видов дрожжей Sac.-imi'ci^'ces cerevisiae, Spoi'o'ooloayces species, Aureobasi-dium -mllulans. Культуру выращивают в
течение 48 часов на сусло-агаре и готовят взвесь на физиологическом растворе с концентрацией 50 млн клеток/мл.
Постановка опыта. Проводят облучение дрожжевых клеток разными дозами УФЛ, часть суспензии оставляют необлученной (контроль). Из обработанной и контрольной суспензии высевают пробы на сусло-агар. По числу выросших колоний определяют ко-
323
личество жизнеспособных клеток в I мл облученной и контрольной суспензии. О мутагенном действии УФЛ судят по соотношению (%) тела мрфологически измененных колоний в контроле и облученных пробах.
Облучение. Суспензию дрожжевых клеток облучают УФЛ, источником которых служит лампа БУФ-15. Используется доза 1300 и 2600 эрг/мм^. Облучение проводят в открытых чашках Петри, диаметр которых 100-110 мм. В чашку наливают по 4 мл суспензии.
Во время облучения суспензию непрерывно перемешивают магнитной мешалкой. 4 мл необлученной суспензии служит контролем.
Для определения количества жизнеспособных клеток в I мл взвеси облученных и необлученных клеток отбирают пробы и делают разведения 1:100,1:1000 и 1:10000. Из двух последних раз-ведений делают высевы по 0,1 мл на чашки с сусло-агаром. Взвесь равномерно распределяют по поверхности питательной среды шпателем.
Обработку облученной суспензии и рассев ее на чашки следует проводить при свете красного фонаря, т.к. при обычном свете происходит фотореактивация облученных клеток.
Определение эффекта УФЛ на клетки.
Засеянные чашки выдерживают при 24° 4-5 суток. Подсчитывают общее число колоний<на чашках и количество морфологически измененных колоний. Результаты вносят в таблицы. Определяют выживаемость клеток в зависимости от дозы облучения и количество морфологических мутантов.
bWll лаь
Летальное действие УФЛ на клетки
Доза облучения Кол-во колоний на чашке пш разведении Кол-во жизне- |Выживае-способных кле4 мость ток в Т мл % \ ....
1:1U0U I:1U0UU ' "
Контроль ТОО
1300 эрг/мм^ ;
2600 эрг/мм^
Мутагенное действие УЗД на клетки
Доза облучения Общее число просмотренных колоний на чашках Кол-во мор- Измен-фологически чивость измененных % колоний 1
Контроль j 1300 эрг/мм^ | 2600 эрг/мм^ \ [ Трансформация у бактерий Трансформация - это процесс гибридиз. котором перенос информации осуществляется ! 1 щии бактерий, при путем передачи ДНК,
экстрагированной из клетки донора, в клетку реципиента без каких-либо посредников. Процесс трансформации подразделяют на 5 фаз:
1. Обратимая фаза контакта ДНК с клеткой-реципиентом. Здесь ДНК еще можно удалить путем отмывания клеток или инактивировать ферментом ДНК-азой.
2. Необратимая фаза проникновения ДНК в клетку-реципиент. Здесь ДНК донора уже не чувствительна к ДНК-азе.
3. Фаза спаривания ДНК донора с ДНК реципиента.
325
4. Фаза интеграции ДНК донора с ДНК реципиента.
5. Фаза репликации ДНК,интегрированной в хромосоме реципиента. Развивается трансформированный клон.
В последних трех фазах ДНК донора также нечувствительна к ДНК-азе.
Путем трансформации можно передать различные признаки: устойчивость к лекарственным препаратам, способность синтезировать ферменты или полисахариды, зависимость от определенных факторов роста и т.д.
Цель работы - получить путем трансформации штамм Вас. subtilis , устойчивый к стрептомицину.
Материалы.
Питательная среда. Мясо-пептонный бульон с 0,1% глюкозы и элективная среда - мясо-пептонный агар с 1% глюкозы, содержащий 100 ед/мл стрептомицина.
Реципиент - клоновая культура В ас .subtilis , чувствитель-
ная к стрептомицину ( Str.s ).
Донор - стрептомицинорезистёнтный штамм Вас. subtilis , из которого выделяют ДНК обычным способом ( strr ). Её растворяют в 0,01 м трис-буфере в концентрации I мкг/мл. ДНК -аза. Раствор готовят на 0,5 м MgCIg с концентрацией фермента 0,1 мг/мл.
Постановка опыта. Культуру реципиента выращивают в течение 18 часов на сахарном МПБ. К I мл бульонной культуры добавляют 0,1 мл раствора ДНК донора и инкубируют при встряхивании в течение Т часа при 37°. Затем делают высев 0,Т мл на элективную среду для опенки эффективности трансформации. Одновременно на эту же среду делают следующие контрольные посе-
вы по 0,1 мл на чашки Петри:
1. Исходная культура реципиента без обработки донорной ДНК
2. Раствор ДНК для проверки его стерильности
3. Контроль на инактивацию трансформирующей активности ДНК. Для этого смешивают 0,1 мл раствора ДНК и 0,1 мл раствора
ДНК-азы, инкубируют при 37° 30 мин, затем добавляют I мл культуры реципиента, инкубируют I час при 37° и делают высев.
4. Контроль для доказательства того, что на определенных стадиях трансформации ДНК донора нечувствительна к ДНК-азе.
Для этого к 0,1 мл культуры реципиента, обработанной ДНК, после I-часовой инкубации добавляют ОД мл раствора ДНК-азы, выдерживают 30 мин при 37° и делают высев.
Засеянные чашки инкубируют 24 часа при 37°, затем регистрируют появление стрептомицинорезистентных колоний на элективной среде.
Предыдущая << 1 .. 72 73 74 75 76 77 < 78 > 79 80 81 82 83 84 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама