Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 92

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 86 87 88 89 90 91 < 92 > 93 94 95 96 97 98 .. 106 >> Следующая

тельно встряхивают и помещают в термостат при 37°. Через 18-20 часов учитывают результат. Учет реакции агглютинации можно производить только при безукоризненных результатах в контроле: равномерной мути в контроле антигена и полной прозрачности в контроле сыворотки.
Учет реакции производят невооруженным глазом, с помощью лупы или в агглютиноскопе.
При положительном результате реакции в пробирках появляются хлопья склеившихся клеток, которые оседают на дно пробирок. дидкость над осадком при этом просветляется. При встряхивании осадка (агглютината) видны хлопья, плавающие в п^Ьрачной жидкости (сравнить с равномерно мутным контролем антигена). Интенсивность реакции выражается" следующим образом:
++++ все клетки находятся в осадке, жидкость совершенно прозрачна. Результат резко положительный.
+++ осадок меньше, нет полного просветления жидкости.
Результат положительный.
++ осадок еще меньше, жидкость мутнее. Результат сла-
боположительный.
+ на дне пробирки незначительный осадок, жидкость
мутная. Сомнительный результат реакции, отсутствие осад,ка, жидкость равномерно мутная, как
в контроле антигена. Отрицательный результат.
Реакция непрямой гемагглютинами (РНГА).
Лри этой реакции происходит агглютинация эритроцитов, на
которых адсорбирован антиген, например, полисахарид микроба, под влиянием специфических к нему антител. 3 качестве антигена применяют взвесь эритроцитов барана или кур с адсорбированным ча них соответствующим антигеном (эритрощтарный диагностику^).
Испытуемую сыворотку прогревают 30 мин при температуре 56° для инактивации имеющегося в сыворотке комплемента, присутствие которого может исказить результаты реакции. В пробирки или в углубления специальных гемагглютинационных досок наливают по 0,5 мл сыворотки, разведенной от 1:10 до 1:1280, и по 0,25 мл диарности кума. Пробирки помещают в термостат на 2 часа, а затем сутки выдерживают при комнатной температуре.
Контролем служит взвесь эритроцитов с заведомо иммунной и нормальной сыворотками. В первом случае должна произойти агглютинация, во втором ее не должно быть. Контролем антигена служит взвесь нормальных эритроцитов, к которым добавлена испытуемая сыворотка. В данном случае агглютинации не будет.
Если при помощи РИГА определяют неизвестный антиген, то эритроциты насыщают заведомо известными антителами.
Имеются модификации этой реакции, в которых вместо эритроцитов используют какой-либо другой нейтральный носитель антигена или антитела, например, частицы латекса или коллодия и т.п.
Реакция преципитации.
Реакцию преципитации ставят в тех случаях, когда в качестве антигена пользуются растворенными веществами: лизатами, экстрактами, гаптенами и т.п. При взаимодействии такого антигена с антителом в присутствии солей образуется преципитат в виде мутного кольца или осадка.
Реакцию преципитации обычно применяют для определения антигена при диагностике ряда инфекционных болезней (сибирской язвы, менингита, пневмонии,дизентерии); в судебной медицине - для определения видовой принадлежности крови и т.д.; при санитарно-гигиенических исследованиях - при установлении фальсификации
ЗсО
продуктов; с её помощью также определяют филогенетическое родство животных, растений и микрс^зганизмов.
Для проведения реакции преципитации необходимы следующие компоненты:
1. Антиген. В качестве антигена используют полные антигены или гаптены микроорганизмов или высших организмов, т.е. растворы веществ белковой,полисахаридной, липополисахаридной или гли-копротеидной природы.
2. Антитело - иммунная сыворотка, содержащая антитела в высоком титре. Титр преципитирующей сыворотки устанавливают по наибольшему разведению антигена, с которым она дает реакцию.
Это разведение в зависимости от природы антигена может колебаться от 1:10000'до 1:10000000 и выше. Сыворотку обычно применяют неразведенной или в разведении 1:5-1:10.
3. Физиологический раствор.
Все компоненты должны быть совершенно прозрачными.
Постановка реакции. Основными методами проведения реакции преципитации являются реакция кольцепреципитации и реакция преципитации в геле.
Реакция кольцепреципитации. Реакцию проводят в специальных пробирках диаметром 0,4-0,5 см и высотой 7-8 см. В пробирку вносят 0,2 мл иммунной сыворотки, на сыворотку осторожно наслаивают такой же объем антигена, чтобы не произошло смешивания ингредиентов. При положительном результате на границе антигена и антитела образуется белое кольцо - преципитат. Учет реакции производят после выдержки в течение 5-30 мин при 37°. Иногда пробирки оставляют еще на ночь в холодильнике.
Контролем антигена служит его раствор, смешанный с физиоло-
гическим раствором; контроль сыворотки - сыворотка с физраствором. В случае необходимости контроля специфичности иммунной сыворотки её смешивают с заведомо гомологичным и гетерологичным антигеном. В первом случае реакция должна быть положительной.
Реакдая преципитации в геле. Особенность этой реакции в том, что взаимодействие антигена с антителом происходит в полутвердой среде - геле, чаще всего агаровом; иногда используют крахмальный гель, полиакриламидный и т.п. Это позволяет четко разграничить друг от друга преципитаты, образованные различными системами антиген-антитело, которые благодаря неодинаковой скорости диффузии и неодинаковой концентрации встречаются и образуют преципитат в разных участках геляПоэтому этот метод носит название иммунодиффузии. Часто иммунодиффузию комбинируют с электрофорезом в геле. Иммуноэлектрофорез является весьма ценным методом в иммунологии и иммунохимии.
Предыдущая << 1 .. 86 87 88 89 90 91 < 92 > 93 94 95 96 97 98 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама