Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 93

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 87 88 89 90 91 92 < 93 > 94 95 96 97 98 99 .. 106 >> Следующая

ИммунодисЕхЬузия. В качестве примера можно рассмотреть двойную диффузию по Ухтерлони, т.к. этот метод нашел наиболее широкое распространение. Реакций проводят в чашках Петри или на предметных стеклах (микрометод). Дно чашки должно быть совершенно ровным, на стекле не должно быть царапин. На дно чашек предварительно наливают Т% раствор агара в воде, после чего их высушивают в термостате. Это делают для того, чтобы реагенты из лунок не проникали под слой агара. Затем на чашку выливают расплавленный 1,5% агар, растворённый в физиологическом растворе или в буфере при pH 7,2. Слой агара должен быть толщиной около 3 мм и одинаковой толщины, для чего чашки ставят на строго горизонтальную поверхность. После того, как агар застынет, в нем проделывают лунки специальными резцами или обычным
362
лабораторным сверлом,используя трафарет, чтобы расстояние между лунками было всегда одинаковым (рис.96). В лунки вносят растворы антигена и иммунную сыворотку. Жидкость должна заполнить лунки, но не вытекать из них. Чашки помещают во влажную камеру, чтобы предотвратить высыхание агара, и выдерживают при комнатной температуре. Четкие линии преципитации обычно получают через 3-7 дней в зависимости от свойств антигена и антитела и их концентрации. При двойной диффузии антигены и антитела диффундируют навстречу друг другу в агаре. Они встречаются между двумя лунками и преципитируют в различных местах в зависимости от концентрации реагентов и скорости диффузии. Обычно каждая пара антиген-антитело образует одну полосу преципитации. Число полос преципитации показывает число таких пар, содержащихся в данной системе. Однако некоторые пары могут остаться необнаруженными вследствие неподходящего соотношения концентраций, недостаточного количества реагирующих веществ, накладывания одной линии на другую и т.д. Чтобы установить наиболее благоприятные соотношения концентраций антигена и антител, те и другие можно брать в опыт в разных разведениях.
Рис.96. Различные схемы иммунодиффузии. А. Расположение лунок в чашке. Диаметр лунок 5 мм,расстояние между краями лунок о мм. Иммунную сыворотку наливают в центральную нунку. Б. Расположение чунок на предметном стекле.Диаметр лунок 2 мм.Расстояние между краями лунок 2,5 мм.Иммунную сыворотку наливают в зачерненные на рисунке резервуары.
о оооооо о
оо о о о • 0*0*
О о о о о
Б
А
ЗоЗ
Чувсавительность иммунодиффузионного метода сравнительно невелика (таблица II).
Таблица IT.
Сравнительная чувствительность серологических реакций
Метод Наименьшее количество определяемого азота антител (в мкг)
Кольцепреципитация 3-5
Иммунодиффузия 5-10
Агглютинация 0,05-1,0
Непрямая гемагглютинация 0,1 - 0,2
Связывание комплемента 0,1
Иммуноэлектооаорез.
Принцип метода заключается в том, что при иммуноэлектрофорезе исследуемый антиген сначала фракционируют электрофоре-тически, а затем полученные фракции анализируют на той же пленке геля методом двойной диффузии при помощи антисыворотки, внесенной в траншею, которая расположена параллельно направлению электрофоретического разделения.
ЭлектроДюрез. Электрофорезом называют движение коллоидных частиц или макромолекул в растворе под действием внешнего электрического поля. Такое движение коллоидных частиц возможно, когда они несут электрический заряд. Электрический заряд частиц или макромолекул может возникнуть двумя путями: или вследствие адсорбции ионов низкомолекулярных веществ на поверхности коллоидной частицы, или вследствие электролитической диссоциации ионогенных групп макромолекулы. Во внешнем электрическом поле ;,ви-
жутся не только коллоидные частицы или макромолекулы, но и ионы низкомолекулярных веществ. Это явление в отличие от электрофореза называют ионофорезом.
Направление, в котором частицы передвигаются в электрическом поле, зависит от их электрического заряда. Отрицательно заряженные частицы будут двигаться к аноду, а положительно заряженные - к катоду. Знак заряда частицы (макромолекулы) зависит от pH среды. Это обстоятельство имеет особое значение для цвит-терионов (например, растворов белков).
Различие в скорости движения макромолекул под действием электрического поля, позволяет проводить их пространственное разделение. Для того,чтобы фиксировать полученные при электрофорезе зоны, его проводят в подходящем инертном носителе, пропитанном буферным раствором. Для целей иммуноэлектрофореза наиболее удобными являются гели (агаровый,крахмальный и др.).
Условия электрофореза (состав буфера, напряжение тока,силу тока, сечение пластинки геля и т.д.) выбирают в зависимости от свойств анализируемого вещества. Например, при электрофорезе белков сыворотки используют вероналовый буфер pH 8,6, ионная сила буфера 0,05, напряжение на электродах 200 в, сила тока 10-12 мА на I см^ сечения агаровой пластинки, градиент напряжения
2,5 в/см. При соблюдении этих условий белки разделяются за
4-4,5 часов.
Иммунопрешпитация. После электрофоретического разделения на определенном расстоянии от лунки, куда был внесен исследуемый антиген, прорезают траншеи для иммунной сыворотки. Расстояние между лункой и траншеями зависит от концентрации антигена и титра сыворотки. Для каждой конкретной системы условия опыта
Предыдущая << 1 .. 87 88 89 90 91 92 < 93 > 94 95 96 97 98 99 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама