Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 94

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 88 89 90 91 92 93 < 94 > 95 96 97 98 99 100 .. 106 >> Следующая

подбираются индивидуально. После внесения иммунной сыворотки в траншеи пластинку ставят на несколько дней в герметически закрытую влажную камеру. По существу реакция преципитации при иммуноэлектрофорезе не отличается от двойной диффузии в агаре и подчиняется тем же закономерностям. Первые дуги преципитации появляются уже через 24 часа, максимальное количество преципитатных дуг обнаруживается через 3-7 дней.
. Рис.97. Иммуноэлектрофорез. Схема постановки опыта.
Для идентификации антигенов используют различные приемы, например, моновалентные сыворотки, т.е. иммунные сыворотки, содержащие антитела против определенного антигена, содержащегося в смеси (рис.97).
Реакция связывания комплемента (РСК).
Реакция связывания комплемента относится к сложным серологическим реакциям: в ней участвует комплемегт и две системы антиген-антитело. Первая система, как и в описанных ранее реакциях иммунитета, является специфической. Вторая система состоит из эритроцитов барана и соответствующей им гемолитической сыворотки. Она называется гемолитической системой и является индикатором образования комплекса антиген-антитело (первой сис-
ЗОо
темы) с комплементом.
В присутствии комплемента в гемолитической системе происходит лизис эритроцитов. Если комплемент связан специфической системой, гемолиза не будет.
РСК, благодаря высокой чувствительности и специфичности, нашла широкое применение при серодиагностике ряда инфекционных болезней и для идентификации антигенов. Особенно широко РСК применяется при диагностике сифилиса (реакция Вассермана) и других спирохетозов, риккетсиозов, вирусных инфекций и т.д.
Реакция связывания комплемента протекает в две фазы. В первой - специфической - взаимодействуют антиген, антитело и комплемент. Если антиген соответствует антителу, они соединяются и образуют комплекс, который связывает комплемент. Образовавшееся соединение внешне не проявляется. О его образовании узнают с помощью индикатора, которым является гемолитическая система, участвующая во второй, индикаторной,фазе реакции.
Гемолитическая система состоит из эритроцитов барана и соответствующей гемолитической сыворотки. Гемолитическая сыворотка, реагируя с эритроцитами, делает их чувствительными (сенсибилизирует) к действию комплемента, в присутствии которого эритроциты разрушаются (лизируются). Если лизиса нет, значит комплемент связан первой системой и, следовательно, антиген в ней соответствует антителу. Отсутствие гемолиза регистрируют как положительный ответ. Если в испытуемой системе антиген не соответствует антителу, иммунный комплекс не образуется и комплемент остается свободным. Свободный комплемент участвует во второй системе, вызывая гемолиз эритроцитов, результат РСК
387
1
при этом отрицательный.
Ввиду сложности РСК все компоненты, участвующие в ней, долж- j ны быть предварительно оттитрованы и использованы в реакции в определенных количествах и в равных объемах. Обычно каждый из них берут в объеме 0,5 или 0,2 мл.
Ингредиенты реакции.
Гемолитическая сыворотка. Её получают обычно в производст-
<
венных условиях, иммунизируя животных (кроликов) эритроцитами барана. После того как у животных выработается достаточное количество антител к эритроцитам, у них берут кровь для получения иммунной сыворотки. Сыворотку прогревают при 56° 30 мин, чтобы инактивировать содержащийся в ней комплемент и титруют, т.е. определяют активность. Титром гемолизина является то наибольшее разведение сыворотки, при котором происходит полное растворение ¦
3t взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента.
Эритроциты барана. Кровь у барана берут из яремной вены.
Её собирают в стерильную банку со стеклянными бусами и энергично встряхивают в течение 10-15 мин(дефибринируют). Эритроциты отмывают от плазмы физиологическим раствором при центрифугировании (2000 об/мин 10 мин). Операцию повторяют трижды. Прозрачную надосадочную жидкость отсасывают, а из осадка готовят взвесь на физиологическом растворе в концентрации 3%.
Комплемент. Это неспецифический многокомпонентный белок, содержащийся в свежей сыворотке человека и теплокровных животных. Больше всего комплемента в сыворотке морской свинки. Ее обычно используют в качестве источника комплемента в реакциях иммунитета. Непосредственно перед опытом комплемент титруют. I
388
Титром комплемента называется его наименьшее количество, в присутствии которого гемолитическая сыворотка растворяет 3^ взвесь эритроцитов барана при 37° в течение часа.
Антиген. Антигеном в РСК обычно используется экстракт клеток или их определенная фракция. В качестве антигена может быть использован и гаптен. Реже используют взвесь микроба.
Антитело. Сыворотка больного, или иммунная сыворотка, или иммунный гамма-глобулин. Сыворотку перед опытом прогревают для инактивации содержащегося в ней комплемента.
Проведение опыта.
При постановке РСК важна последовательность добавления компонентов реакции. Вначале в пробирки вносят сыворотку в определенном разведении, затем антиген и комплемент в рабочей дозе. Опыт сопровождают контролями всех ингредиентов: сыворотки, антигена, комплемента и гемолитической системы. Пробирки встряхивают и инкубируют при 37° I час или 18 час в холодильнике при 4°. За это время при наличии специфического комплекса происходит связывание комплемента. Далее во все пробирки вносят гемолитическую систему, т.е. смесь взвеси эритроцитов и гемолитической сывортки. Вторая фаза реакции проходит при 37°. Результаты опыта отмечают после того, как становятся прозрачными пробирки контроля антигена, сыворотки и комплемента. В контроле гемолитической системы не должно быть гемолиза, т.к. в этой пробирке комплемент полностью отсутствует.
Предыдущая << 1 .. 88 89 90 91 92 93 < 94 > 95 96 97 98 99 100 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама