Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Данилин Н.Ф. -> "Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии" -> 97

Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии - Данилин Н.Ф.

Данилин Н.Ф. Методические рекомендации по молекулярно-генетическим основам микробиологии — Ленинград, 1982. — 416 c.
Скачать (прямая ссылка): metodrekomendaciipomolekulyarnim1982.pdf
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 106 >> Следующая

При титровании в жидких средах в ряд пробирок наливают питательную среду в строго определенном объеме. Количество пробирок определяется количеством разведений препарата, которое необходимо взять в опыт. В первую пробирку вносят определенное количество раствора антибиотика, перемешивают, затем опреде-
397
ленный объем смеси из первой пробирки переносят во вторую, перемешивают и переносят то же количество смеси из второй в третью и т.д. Из последней пробирки, содержащей антибиотик, такой же объем смеси выливают прочь, чтобы во всех пробирках объем жидкости был одинаков. Две пробирки, не содержащие антибиотика, являются контрольными. После этого во все пробирки, содержащие серийно разведенный антибиотик,и в одну контрольную пробирку вносят одинаковое количество взвеси тест-культуры. Вторая контрольная пробирка содержит только питательную среду. Штатив с пробирками встряхивают и ставят в термостат при 37° на 18-20 часов.
Кратность разведения антибиотика обычно выбирают равной двум, для этого в каждую пробирку наливают, например, по I мл бульона, в первую пробирку вносят I мл раствора антибиотика и переносят из пробирки в пробирку по I мл смеси. При этом точность определения активности препарата составляет + 50*. Точность определения можно повысить путем дополнительных разведений антибиотика,например, используя кратности 1:1,1; 1:1,15; 1:1,20 и т.д.
Взвесь тест-микроба готовят на физиологическом (0,65*) растворе jfkCI при обязательном сравнении со стандартами мутности. При титровании антибактериальных антибиотиков микробная нагрузка обычно составляет 1000 микробных клеток на I мл раствора антибиотика в питательном бульоне. Этого достигают следующим образом. Готовят взвесь тест микроба по стандарту 10 ед. мутности, что составляет I млрд микробных тел в I мл. Из этой взвеси берут 0,1 мл и вносят в 9,9 мл-физиологического раствора, получая таким образом разведение в 100 раз. Полученную
взвесь таким же образом разводят еще в 100 раз, достигая концентрации микробных тел 100000 в I мл. Эту взвесь разводят в 10 раз, внося I мл её в 9 мл физиологического раствора. Полученную взвесь вносят в пробирки с серийно разведенным антибиотиком по 0,1 мл на I мл питательного бульона.
Метод серийных разведений в плотных средах отличается тем преимуществом, что микробы-загрязнители легко выявляются и по существу не изменяют общих результатов титрования, тогда как на жидких средах весь опыт может оказаться безрезультатным из-за попадания в пробирки хотя бы единичных клеток посторонних устойчивых микроорганизмов. Этот метод используют также при работе с микроорганизмами, которые не растут на обычных жидки;' средах, например, туберкулезная палочка, которую выращивают на среде, содержащей свернутую сыворотку.
Вначале готовят ряд серийных разведений антибиотика, а затем вносят по I мл кавдого разведения в пробирку, содержащую 4 мл расплавленной и охлажденной до 45-50° агаризованной среды. Затем пробирки скашивают до застывания агара, а на поверхность плотной среды петлей засевают взвесь тест-микроба.
Для выявления бактерицидное действия препарата девают высев на МПА из всех пробирок, где визуально не отмечен рост микроорганизма. Для стойких антимикробных веществ, которые абсорбируются на микробных клетках и препятствуют их росту даже в свежей питательной среде, применяют соответствующие нейтрализаторы. Результаты опыта вносят в таблицу.
Определение активности антибиотика методом серийных
разведений
Тест-культура Разведение антибиотика Контроль Контроль пи-
культуры тательной среды
БСД 4+ -
БЦЦ . 4+
4+- - отчетливый рост микроорганизма
- - отсутствие роста БСД- бактериостатическое действие БЦЦ- бактерицидное действие
Определение активности антибиотиков методом дисЕхЬузии в
агар
Этот метод точнее, чем метод серийных разведений, поэтому он чаще используется на практике.
Материалы: чашки Петри (лучше со шлифованным дном), горизонтальный столик из зеркального.стекла с ватерпасом, цилиндрики из нержавеющей стали с размерами: высота*8 мм, наружный диаметр 8 мм, внутренний диаметр б мм, голодный агар для базисного слоя, питательный агар, тест-микроб и антибиотик. При использовании стандартных чашек Петри со шлифованным дном использование базисного слоя агара необязательно.
Ход опыта. Голодный агар разливают по 15 мл в чашки Петри, размещенные на горизонтальном столике. После застывания агара чашки подсушивают в термостате, затем в каждую чашку наливают по 5 мл питательного агара, смешанного с тест-культурой. Количество последней берут из расчета 20 млн клеток на I мл среды.
400
Перед внесением культуры в агар, его необходимо охладить до 45-50°. Вместо цилиндров можно использовать лунки, которые делают в агаре с помощью специального приспособления.После застывания второго слоя агара на его поверхность наносят по трафарету б цилиндров на каждую чашку. В 3 из них через один вносят по 0,1 мл стандартного раствора (контроль). После этого чашки помещают в термостат при 37° на 16-18 часов. По истечении этого времени цилиндры удаляют с чашки, а размеры зон задержки роста тест-микроба измеряют с помощью крон-цирк^ля или с помощью оптического светового фонаря. Среднеарифметическая величина диаметра зон не до-тана иметь отклонения более чем ± I мм.
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 106 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама