Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Гершкович А.А. -> "Химический синтез пептидов" -> 108

Химический синтез пептидов - Гершкович А.А.

Гершкович А.А., Кибирев В.К. Химический синтез пептидов — К.: Наукова думка, 1992. — 360 c.
ISBN 5-12-003103-Х
Скачать (прямая ссылка): himsintezpeptidov1992.djvu
Предыдущая << 1 .. 102 103 104 105 106 107 < 108 > 109 110 111 112 113 114 .. 123 >> Следующая

327
эелка с пептидным лигандом:
<1
N+CI-
I
А/ А/ uv і
(160) ^ ^
•і I
N9
Pep—Туг -I
Na1S2O4
"V^N=N-<^ ^—NH-Prot
N.
он
Pep—Туг ~ + Prot—NH-^—NH.
4V^NH2
OP
Ниже приводятся методики синтеза реагентов для конъюгации пептидов и примеры получения пептидно-белковых конъ-югатов.
Методика 313. Конъюгация при помощи водорастворимого карбодиимида [530].
Синтетический пептид и кроличий сывороточный альбумин в молярном соотношении 1 ! 2 растворяли в 2 мл воды и добавляли к раствору 200 мг 1-этил-3-(3-диметил-аминопро-пил)карбодиимида, растворенного в 0,5 мл дистиллированной воды. Реакцию вели при pH 7 при комнатной температуре 24 ч. Избыток карбодиимида удаляли диализом реакционной смеси против дистиллированной воды в течение 24 ч при охлаждении. По данным аминокислотного анализа, соотношение белок \ пептид в конъюгате составляло 7:1.
Для получения конъюгатов, содержащих большое количество пептида, в реакцию вводят большой молярный избыток пептида по отношению к белку.
Методика 314. Конъюгация при помощи глутарово-го диальдегида [531].
328
Добавляли пептид в 30-кратном молярном избытке к 0,15 мкмоль бычьего сывороточного альбумина (BSA) в 1 мл 0,1 M натрий-фосфатного буфера (pH 7,5), К полученному рас-твэру добавляли по каплям в течение 0,5 ч при комнатной температуре при перемешивании 300 мкл 21 мМ раствора глута-рового альдегида. Через 0,5 ч перемешивания при комнатной температуре конъюгат очищали на колонке с Сефадексом G-15.
Методика 315. Синтез 1-окси-3-сульфо-2,5-пирроли-диндиона(Ы-оксисульфосукцинимида) [506]
NaO3S
-он і КаА°* і- I >-он
К раствору 1,54 г (12,8 ммоль) N-оксималеимида в абсолютном спирте в токе азота добавляли водный раствор Na2S2O6. Реакционную смесь перемешивали 2 ч при комнатной температуре в токе азота, а затем' реакционную смесь упаривали на роторном испарителе в вакууме водоструйного насоса при 40 0C Остаток — желтое масло — растворяли в воде и лиофи-лизировали. Светло-желтый твердый остаток растирали с эфиром, и полученный не совсем белый порошок отфильтровывали и сушили. Выход 2,66 г (96 %), т. пл. выше 300 РС, Rf = 0,32 (н. бутанол — уксусная кислота — вода, 5 і 2 ! 3).
Методика 316. Динатриевая соль бш>^-оксисуль-фосукцинимидного)эфира пробково* кислоты [506]
SO5Na
COOH X. ^SO3Na
/ / ДЦГК
(CH2)e + 2HO-rf J
COOH V \ \\ SO3Na
Растворяли 0,44 г (2 ммоль) натриевой соли N-оксисульфо-сукцинимида, 0,174 г (1 ммоль) пробковой кислоты и 0,41 р (2 ммоль) ДЦГК в 5 мл диметилформамида и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем 2 ч при О 9C Отфильтровывали дициклогексилмочевину и продукт осаждали 20-кратным количеством этилацетата. Твердый осадок отфильтровывали и сушили.
22 2-882
329
Методика 317. Динатриевая соль бш>(2-нитро-4-суль-фофенилового) эфира адипиновой кислоты [507]
К раствору 1,46 г (10 ммоль) адипиновой кислоты и 6 г (20 ммоль) тригидрата натриевой соли 2-нитро-4-сульфофено-ла в 50 мл ДМФА при 0 °С и перемешивании прибавляли 4,2 P (20 ммоль) ДЦГК, выдерживали 2 ч при этой температуре и оставляли на ночь при 20 0C Отфильтровывали дициклогек-силмочевину, удаляли в вакууме ДМФА и остаток растирали о эфиром. После перекристаллизации из спирта получали 5 P (85 %) желтого порошка с т. пл. 305—307 °С (разл.).
Аналогично получали динатриевую соль бш>(2-нитро-4-сульфофенилового) эфира азелаиновой кислоты с выходом 60 %, т. пл. 300—302 0C (разл.)
Методика 318. Общий метод конъюгации пептидов при помощи водорастворимых эфиров дикарбоновых кислот.
Растворяли 1,5 мг BSA в 0,5 мл 0,1 M растворе бикарбоната натрия (pH 8,5), добавляли к нему 0,5 мг пептида и 0,5 мр сшивающих реагентов, описанных в приведенных выше методиках. Выдерживали реакционную смесь ночь при комнатной температуре, разлагали непрореагировавшие активные группы водным аммиаком и отделяли конъюгат на колонке ссефадексом Q-25 (или диализовали). Оптимальные условия конъюгации (время и молярное отношение пептид : белок) в каждом отдельном случае нужно подбирать экспериментально.
Методика 319. Синтез малеимидо-6-аминокапроновой кислоты [511]
- Кипятили раствор 20 г (0,09 моль) N-малеиламинокапро-новой кислоты в 500 мл уксусной кислоты в течение 24 ч. Удаляли уксусную кислоту в вакууме и оставшееся масло растворяли в 100 мл хлороформа. Незациклизовавшаяся N-мале-иламинокапроновая кислота выпадала в осадок при стоянии в течение ночи при комнатной температуре. После фильтрации
COOH
(СН,)4 + 2HO-<f ~>-S03Na
C-0-<f ^-SO3Na
'^N-(CHi)1-COOH
330
хлороформенный раствор упаривали до малого объема и очищали на колонке с силикагелем (объем неподвижной фазы 600 мл) в смеси хлороформ: уксусная кислота (95:5). Раствор, содержащий чистые фракции, упаривали и получали 9 F продукта, который перекристаллизовывали из 30 мл горячего хлороформа.
Методика 320. Натриевая соль 2-нитро-4-сульфофе-нилового эфира малеимидо-6-аминокапроновой кислоты [511]

8 \n-(CH2)5-COOH + НО-<( ^>-S03Na ШЬ*
CH~S0 /~
NO2
,О О
CH-C^ Il /—ч
>n-(CHa)5-C-0-^ ^-SO3Na
Предыдущая << 1 .. 102 103 104 105 106 107 < 108 > 109 110 111 112 113 114 .. 123 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама