Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Хохлов А.С. -> "Химические регуляторы биологических процессов " -> 9

Химические регуляторы биологических процессов - Хохлов А.С.

Хохлов А.С., Овчинников Ю.А. Химические регуляторы биологических процессов — Знание, 1969. — 144 c.
Скачать (прямая ссылка): fizregulyatori1969.djvu
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 51 >> Следующая

25
целлюлоза) или основные груивировжн (диэтиламиноэтилцел-люлоза, ДЭАЭ-целлюлоза), В этих случаях вытеснение исследуемого соединения ведут обычно раствором соли повышающейся концентрации (создают градиент концентрации), причем различные вещества элюнруются при строго определенной концентрации соли (ряс. 5). Антибиотнкн-стревтотри-цияы имеют очень сходнее строение, но содержат различное число остатков аминокислоты рЧаизина. В этом случае легче всех вытесняете* соединение, содержащее один остаток р*-ли-знва (стрептотрицин F), ват» соединение с двумя остатками рЧпизияа (стрептотрвдни E) и т, д. Ионообменная хроматої
Ao9» F MUbQ
.20 40 бо so mm w&mw
Рис. 5. Ионообменная хроматография смеси стрептоцидкаон.
графия на карбоксиметилцеллюлозе настолько четко воспроизводится, что этот метод можно использовать для количественного анализа смеси сгрептотрицинов. В то же время разделение стрептотрицинов другими методами из-за их лабильности и близости свойств представляет очень сложную задачу» При очистке высокомолекулярных биорегуляторов (в особенности ферментов) очень большое значение быстро приобрела гельхроматография, позволяющая быстро разделять вещества в зависимости от их молекулярного веса. Как показывает название, хроматографию ведут на специальных гелях (гели агара, полиакриламидные гели и др.)- Наиболее часто используют для этих целей специальные декстрановые гели, выпускаемые под названием «Сефадекс». Принцип гельхро* матографни состоит в следующем. Сухому гелю дают набухнуть в воде (или каком-либо водном буферном растворе) и набухшим гелем заполняют колонку. Зерна геля свободно проницаемы для воды и низкомолекулярных веществ (солей, аминокислот, моносахаридов, ио непроницаемы (или частично проницаемы) для веществ с высоким молекулярным весом. Если на такую колонку с гелем нанести пробу, содержащую раствор смеси трех веществ, то будет происходить их разде-
26
ление (рис. 6). Низкомолекулярные вещества (изображенные на рисунке мелкими точками) будут свободно диффундировать как в воду между частицами геля, так и в сами частицы (изображенные светлыми кружками). Молекулы высокомолекулярного соединения (изображенные крупными черными точками) не смогут проникнуть внутрь частин геля и будут двигаться вместе с объемом воды между частицами, т. е. значительно быстрее низкомолекулярных веществ. Поведение веществ со средним молекулярным весом будет промежуточным — они будут лишь частично проникать в частицы геля.
Рис. 6. Принцип гелъхроматотрафии.
Таким образом, они будут отставать от высокомолекулярных веществ, но обгонять низкомолекулярные. Если колонка достаточно длинна, то произойдет полное разделение трех веществ (рис. 7) — в первую очередь из нее выйдет раствор высокомолекулярного вещества, затем вещества со средним молекулярным весом, а затем ниэкомолекулярные вещества. Поскольку при гельхроматографии условия очистке очень мягкие, этот метод быстро нашел широкое применение.
При очистке и в особенности при проверке гомогенности выделенного нрепарата очень большое значение имеют раз-
27
личные электрофоретические методы, основанные на движении изучаемого вещества в каком-то носителе под влиянием электрического тока. В качестве носителей часто применяют бумагу, крахмальный гель, полиакрнламидный гель и другие пористые материалы.
Обычно выделение й-очистка нового биорегулятора являются сложной задачей, при решении которой используются самые разнообразные методы и их комбинации. В качестве характерного примера современной методики довольно сложной очистки ниже приведен способ изолирования фермента аргиназы, способного расщеплять аминокислоту аргиинн (Сору, 1965). Ее получают йг культуры бактерий Staphylo-
0 Ю 20 80 40 50 60 70 8Dm
1 ¦ і і ¦ і , , і —-,— і
Рис, 7. График разделения веществ при гельхрома-тографии.
coccus aureus (золотистый стафилококк). Микроорганизм выращивают в течение 24 часов прн 37° иа питательной среде с агаром. Затем бактериальные тела отделяют, несколько раз тщательно промывают раствором соли и водой, после чего высушивают многократной промывкой ацетоном.
Полученные сухие клетки суспендируют в воде нли растворе хлористого марганца и оставляют на 24 часа для автолиза (самопереваривания). Неразрушившиеся клетки отделяют центрифугированием, а фермент осаждают путем прибавления четырех объемов ацетона. Выпавший осадок отделяют и высушивают» Затем его растворяют в небольшом объеме солевого раствора и очищают гельхроматографией на сефадексе G-25. Каждую фракцию проверяют на содержание белка и аргииазную активность, мерой которой является ко-
28
24 26 28 SO 32 34 36 SS 40 42 44
Рис 8 Очистка фермента гельхроматографией.
Рис 9. Очистка ферментов электрофорезом.
личество мочевины, отщепляемой в стандартных условиях от аргинина* Результаты этой стадии очистки графически изображены на рис. 8. Основная масса фермента выходит довольно узкой фракцией, отделяясь от большого количества сопровождающих белков, Полученную фракцию очищают далее электрофорезом на другом геле — сефадекс G-200 (результаты представлены на рнс. 9), Прн этом присходит дальнейшая очистка фермента от посторонних белков. Выделенный препарат далее очищают путем кристаллизации, которая происходила при осторожном прибавлении к его водному раствору холодного ацетона. При последующем изучении различными методами полученная кристаллическая аргиназа оказалась гомогенной,
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 51 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама