Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 101

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 95 96 97 98 99 100 < 101 > 102 103 104 105 106 107 .. 126 >> Следующая

где L — поток вещества за единицу времени через площадку de
1 см2;----градиент концентрации; D — коэффициент диффузии.
Размерность коэффициента диффузии — см2/сек. Отрицательный знак в выражении (23) указывает на то, что диффузия идет в сторону уменьшающейся концентрации. Пользуясь первым законом Фика, можно определить величину коэффициента диффузии. Чаще для определения D используют уравнение диффузии:
Величину D находят, решая это уравнение для конкретных условий опыта.
Измерение коэффициента диффузии производится на специальных приборах по скорости размывания искусственно созданной резкой границы между раствором исследуемого вещества и чистым растворителем (подробнее см. [5]). Возможно также определение коэффициента диффузии и из ширины границы седиментации. При этом в любом случае требуется высокая степень гомогенности исследуемого вещества.
Если коэффициент диффузии необходимо привести к стандартным условиям, то, учитывая выражение (17), аналогично
(23)
Yl Физические методы исследования белков
257
выводу уравнения (21) можно получить выражение для приведенного коэффициента диффузии:
п _ г) ' 273
273+ t 1 Vj10
где индекс t относится к условиям опыта, а индекс 0 — к стандартным условиям; t — температура, в °С.
Для измерения молекулярных весов необходимо определение величины (1 — Vpp) в выражении (19). Значение парциального удельного объема V для белков лежит между 0,70—0,75 мл/г, а плотность растворителя (водный буферный раствор) близка к единице. Таким образом, точность определения молекулярного веса в значительной мере зависит от точности определения парциального удельного объема V. Стандартный метод определения V заключается в измерении пикнометрическим способом (взвешивание фиксированных объемов растворителя и раствора) плотности растворителя рр и плотности раствора р с концентрацией растворенного вещества, равной с г/мл. Удельный парциальный объем определяется из выражения:
Pp с\ рр J
Для белка или полипептида, аминокислотный состав которых известен, парциальный объем может быть вычислен на основании парциальных объемов аминокислот [36, 37].
Для некоторых веществ выражение (19), при помощи которого определяются молекулярные веса белков и синтетических полимеров, не может быть использовано для этой цели ввиду невозможности определения коэффициента диффузии (вещество нестабильно и разлагается за время диффузионного опыта или имеет очень малый коэффициент диффузии). К таким веществам относятся нуклеиновые кислоты. В этом случае молекулярный вес можно определить по формуле Манделькерна — Флори:
"s0 [ті]1/з ti0jV
мш =
? (1 - Vpn) J
(24)
где [г|] — характеристическая вязкость; s0 — константа седиментации; Mw —средневесовой молекулярный вес; Na—число Авогад-ро; T)0 — вязкость растворителя; рр—плотность растворителя; ? — параметр, определяющий степень доступности объема, занятого макромолекулой, для молекул растворителя.
Таким образом, применение этой формулы требует определения трех основных величин: характеристической вязкости [г|], константы седиментации s° и параметра ?, который может также зависеть от молекулярного веса. Для большого класса линейных
258
цепных макромолекул параметр ? постоянен в широком диапазоне молекулярных весов и в среднем близок к величине 2,5•1O6. В настоящее время накоплен и 'обобщен большой материал для установления зависимости характеристической вязкости [ц] и константы седиментации s0 от молекулярного веса ДНК различного происхождения [8]. Молекулярный вес ДНК определялся либо методом светорассеяния (до М=3-106), либо (для более высоких М)ауто-радиографически при помощи электронного микроскопа. На рис. 22 приведена зависимость sl0iW от средневесового молекулярного веса Mw при концентрации NaCl в растворе от 1 до 0,1 M
s°20,u>
5 -
2 -
11-1—і і і і 111-1—і—......і_і і .......
0,5 1 2 5 10 20 50 100 Mw-Ws
Рис. 22. Зависимость константы седиментации s°0| w от молекулярного веса нативной ДНК [8]
(см. также рис. 10.) Используя общую зависимость s°0 w1 нативной ДНК от молекулярного веса (рис. 22), можно оценить молекулярный вес исследуемой ДНК непосредственно из кривой. Кроме того, возможно использование эмпирических выражений, полученных из этой кривой:
slo ,W = 0,116Л10'326 (для молекулярного веса от 0,3 до 3 млн.); S2o, ю = 0.034Л10,405 (для молекулярного веса свыше 3 млн.).
Коэффициент ?, определенный по данным, приведенным на рис. 10 и" 22 (М, [ц] и Sao,и>) и из выражения (24), слабо зависит от молекулярного веса, совпадает с теоретически вычисленной зависимостью для полужесткой цепной молекулы и лежит в интервале значений "от 2,70•1O6 до 2,2;Ю6 при среднем значении 2,5•1O6.
1 Константа седиментации S^0 w может быть заменена коэффициентом седиментации s, если он определен при концентрации раствора не более 2 • Ю-2 мг\мл ДНК. Отличие от константы седиментации составляет в этом случае не более нескольких процентов.
17* 259
Аналогичный подход возможен для определения молекулярного веса денатурированной ДНК, РНК и синтетических поли-нуклеотидов.
Предыдущая << 1 .. 95 96 97 98 99 100 < 101 > 102 103 104 105 106 107 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама