Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 103

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 126 >> Следующая

Распределение концентрации по высоте пробирки, как правило, линейно, но может быть и экспоненциальным, 5-образным. Формирование градиента в пробирке производится специальным устройством, схема которого приведена на рис. 24. Устройство состоит из двух шприцев, соединенных общей выводной трубкой. Один из шприцев заполняется концентрированным раствором сахарозы в соответствующем буферном растворителе, другой — чистым растворителем. Перемешивание растворов происходит в выводной трубке. При постоянной скорости движения поршней концентрация сахарозы в растворе, вытекающем из устройства, изменяется линейно со временем. Соответственно в пробирке^ образуется линейное распределение плотности сахарозы по высоте пробирки. Для получения других форм распределения плотности по высоте скорости движения поршней изменяются по любому заданному закону при помощи кулачков различной формы. Усло-
ние компонент смеси биополимеров. Центрифугирование выполняется обычно с помощью, препаративных ультрацентри-'
[39]
262
вия седиментации в градиенте плотности отличны от описанных выше.^При седиментации в градиенте плотности раствор, содержащий смесь исследуемых макромолекул, осторожно наслаивается на мениск раствора сахарозы и молекулы седиментируют из верхнего слоя в раствор сахарозы, так что со временем наступает полное разделение седиментирующих компонент (рис. 25).
¦)_^___,___

J-f 1



Рис. 24. Схематическое изображение устройства для создания градиента сахарозы
KJ
а Z
Рис. 25. Разделение веществ при седиментации в градиенте плотности
а — начало опыта (смесь двух веществ наслоена на мениск раствора сахарозы); б— частичное разделение веществ спустя некоторое время; в —момент времени, соответствующий разделению веществ на зоны
При разделении веществ обычным способом, без градиента плотности и наслоения, возможно соосаждение компонент, имеющих различную скорость седиментации. Так, в роторе, дно пробирки которого отстоит от оси вращения приблизительно на двойном расстоянии по сравнению с мениском раствора, быстро осевшие компоненты будут иметь в виде примеси около 40% вещества, седиментирующего втрое медленнее, и около 13% вещества, имеющего в 10 раз меньшую скорость седиментации 141], в то время как в градиенте плотности достигается полное разделение. Кроме обычных факторов разделения, действующих при седиментации,— молекулярного веса компоненты и формы молекулы, в условиях градиента плотности при разделении играет роль также плотность молекул. Это означает, что компонента с плотностью, близкой или равной плотности раствора сахарозы, будет двигаться медленнее или вообще не будет седиментировать в отличие от молекул такого же молекулярного веса и формы, но с большей плотностью. Ченгом и Шахманом [42] показано, что если средняя разность между плотностью частиц и плотностью растворителя составляет 0,052 г/мл, то различие в плотностях частиц на 0,01% изменяет скорость седиментации также только
203
на 0,01%. Если средняя разница между плотностью растворителя н плотностью молекул составляет 0,001 г/мл, а разница в плотностях молекул по-прежнему равна 0,01%, то скорости седиментации отличаются уже на 10%.
После разделения седиментирующего материала на зоны (см. рис. 25, в) центрифугирование прекращают и содержимое пробирки фракционируют, либо разрезая ее специальным устройством на слои, либо сливая по каплям, через дно пробирки, проколотое иглой шприца (наличие градиента на объем капель практически не влияет). Последующий анализ радиоактивности фракций, оптической плотности или ферментативной активности дает возможность установить распределение зон по высоте пробирки, и так как путь, пройденный частицей в линейном градиенте плотности, пропорционален времени центрифугирования, то можно также определить коэффициент седиментации с точностью ~3% [40, 43]. Соответствующий расчет несложен, но громоздок, требует графического интегрирования и поэтому здесь не приводится. Однако заметим, что если в исследуемом растворе имеется одна компонента с известным коэффициентом седиментации, то его можно определить и для других компонент, пользуясь соотношением
где L1— путь, пройденный частицей с неизвестным коэффициентом седиментации S2OyW1 ; L2— то же, для частицы с известным коэффициентом седиментации S2o,w2.
Аналогично можно оценить молекулярный вес частиц с близкой конфигурацией:
в соответствии с выражением (24).
Метод седиментации в градиенте плотности широко распространен в практике биохимических исследований ввиду его хорошей разделяющей способности. Он позволяет разделять нуклеиновые кислоты, фракционировать белки, а также некоторые субклеточные структуры.
д. Метод седиментационного равновесия и приближения к седиментационному равновесию
Предыдущее рассмотрение процессов седиментации относилось к центробежным полям, которые были столь велики, что вызывали седиментацию и разделение молекул, нарушаемые диффузией лишь в относительно небольшой степени. При меньших значениях центробежного поля, когда перенос вещества под дей^
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама