Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 105

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 99 100 101 102 103 104 < 105 > 106 107 108 109 110 111 .. 126 >> Следующая

учетом коэффициентов увеличения оптической системы равна начальной концентрации с0. Определение начальной концентрации должно выполняться в тех же условиях, при которых производится опыт для нахождения распределения концентрации. Расчет требует графического интегрирования [45].
Имеются модификации метода Арчибальда [46, 47], в частности вариант, предложенный Эренбергом, упрощающий процедуру расчета, [47]. В этом случае определяется величина s/D согласно уравнению
(-)
SiD =---^-, (32)
а*хм(А8-А)К
где ( — \ —ордината градиентной кривой на линии мениска; хм — расстояние от оси вращения ротора до линии мениска; К—величина,
263
обратная фактору увеличения системы по оси х\ А$ — площадь пика на снимке, полученном в ячейке с искусственной границей; Л—площадь, ограниченная линией мениска, базовой линией и градиентной кривой в опыте приближения к седиментационному равновесию.
Величина A5 так же, как и в методе Арчибальда, определяется из независимого опыта с искусственной границей. Молекулярный вес определяют, комбинируя уравнение (19) и выражение (32). Метод Арчибальда и его модификации в настоящее время широко применяются в практике определения молекулярных весов белков и синтетических полипептидов. Несмотря на меньшую точность определения молекулярного веса по сравнению с методом седиментационного равновесия, метод Арчибальда привлекателен быстротой проведения опыта, что является существенным при работе с быстро деградирующими препаратами.
При длительном ультрацентрифугировании концентрированных солевых растворов в кювете устанавливается стационарное распреде-^Р?
ление плотности, которое характеризуется градиентом —где рр —
плотность растворителя в данной точке кюветы, находящейся на расстоянии X от оси вращения ротора. Возникновение градиента обусловлено перераспределением концентрации соли при ультрацентрифугировании. Величина установившегося перепада плотности в данной точке кюветы относительно мениска раствора или дна кюветы зависит от состава растворителя, температуры, угловой скорости и расстояния от оси вращения.
Если макромолекулы исследуемого вещества находятся в таком концентрированном солевом растворе, то в соответствии с* выражением (19) они имеют коэффициент седиментации s~ (1—VPp)- Это означает, что в тех областях кюветы, где Урр<^1, вещество седи-
ментирует; в области, где Vpp^> 1, вещество движется против центробежного поля (коэффициент седиментации имеет отрицательный знак). В результате вещество, локализуется в той области кюветы, где
Такий образом, если в концентрированном солевом растворе в начальный момент времени растворенное вещество было распределено по объему равномерно, то с установлением градиента плотности вещество после достижения равновесия сосредоточивается в узкой полосе, плотность в которой равна плотности исследуемой макромолекулы
е. Равновесная седиментация в установившемся градиенте плотности
dx
плотность раствора равна плотности макромолекулы
(рис. 30).
269
Гомогенное вещество при этом локализуется в полосе определенной ширины, что обусловлено тепловым движением макромолекул (броуновское движение). Полидисперсность по молекулярному весу вызывает дополнительное симметричное расширение полосы, полидисперсность по плотности вызывает обычно асимметричное расширение полосы, как это показано на рис. 31 для ДНК тимуса теленка.
6 7 6. 7
Расстояние от оси вращения, см
Рис. 30. Распределение плотности CsCl и концентрации ДНК до начала опыта (а) и после установления градиента плотности (б)
Расстояние от оси вращения
Рис. 31. Распределение концентрации ДНК тимуса теленка в CsCl после достижения равновесия. Асимметричность полосы свидетельствует о полидисперсности плотности
Распределение концентрации гомогенного вещества в зоне его локализации является гауссовым и имеет вид:
с = с0е 2а\ (33)
где X — расстояние от любой точки полосы до ее центра; а — дисперсия гауссова распределения, характеризующая ширину полосы, Cq—-концентрация вещества в центре полосы.
Распределение концентрации в полосе при равновесной седиментации в градиенте плотности можно исследовать как в аналитической, так и в препаративной ультрацентрифуге. В последнем случае используются роторы с откидными стаканами. После достижения равновесия содержимое пробирок анализируется аналогично тому, как это делается в опытах с градиентом сахарозы (см. соответствующий раздел). Время установления равновесия как в аналитическом, так и в препаративном опыте может быть оценено из соотношения:
<== "F(111F+1,26) L>a'
270
где D — коэффициент диффузии исследуемого вещества; L —высота слоя в кювете или пробирке по радиусу ротора; о* — ширина гауссового распределения.
Обычно время достижения полного равновесия составляет от 12 до 60—70 час.
В аналитических ультрацентрифугах регистрация результатов ведется как методом поглощения света, так и методом Фильпота— Свенссона. Первый метод применяется для малых концентраций веществ, поглощающих в ультрафиолетовой области. Здесь необходимо подчеркнуть, что в этом случае следует работать с выдержками, обеспечивающими линейную зависимость почернения пленки от концентрации. Для правильного выбора концентрации вещества в полосе можно воспользоваться следующим соотношением между начальной концентрацией с0 полимера в растворе и конечной концентрацией ск в полосе:
Предыдущая << 1 .. 99 100 101 102 103 104 < 105 > 106 107 108 109 110 111 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама