Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 106

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 100 101 102 103 104 105 < 106 > 107 108 109 110 111 112 .. 126 >> Следующая

C0 = —zz: • — ск =0,40-
с
(в частности, при а=0,02 см —ч =24).
Если в опыте используется абсорбционный метод, оптика Фильпота — Свенссона служит для регистрации градиента плотности раствора. Этот метод может применяться и для самостоятельного изучения вещества в градиенте плотности.
В методе Фильпота — Свенссона для повышения точности применяется двухсекторная кювета. Выбор начальной концентрации исследуемого вещества может быть произведен по формуле
de 0,40 Lcк
= -+-
d*3 УТ о2
На рис. 32 и 33 приведены примеры измерений, выполненных методом поглощения в ультрафиолете и методом Фильпота — Свенссона.
Месельсон, Шталь и Виноград [50], впервые предложившие метод установившегося градиента плотности, показали, что для гомогенного вещества ширина полосы связана с молекулярным весом соотношением,
а2 =-- , (34)
со2*
где R — газовая постоянная; T — абсолютная температура; Po —-
dp
плотность растворителя в центре полосы; —_градиент плот-
dx
ности; X — расстояние от оси вращения до центра полосы;
271
f г j
Рис 32. Распределение ДНК Sireptomyces viriuochro-mogenes и ДНК легкого мыши в градиенте плотности CsCl. Полоса / соответствует ДНК Sireptomyces viridochromogenes. р=1,729 г/см3, полосы 2 и и 3 — ДНК легкого мыши р =1,701 и 1,690 г/см3 [48]
Рис. 33. Распределение растворимого коллагена в градиенте плотности CsBr. Концентрация коллагена 0,3 мг/мл. Фотография получена при помощи метода Филь-пота — Свенссона [49]
ы — угловая скорость; A4 — молекулярный вес; а — дисперсия гауссова распределения, для гомогенного вещества.
¦ Для нахождения дисперсии о1 необходимо экспериментально опрег делить распределение концентрации вещества в полосе и построить график: — In с, — ~ X2 + In c0 т. е. зависимость In с от Jt2 (33). Для гомогенного вещества эта зависимость линейна и о1 определяется по тангенсу угла наклона, равному -^. Наличие полидисперсности по молекулярному весу вызывает искривление этой прямой, обращенное выпуклостью вверх. Выпуклость вниз указывает на наличие полидисперсностн плотности. При наличии полиднсперсности только по молекулярному весу формула (34) дает так называемый средне-численный молекулярный вес Mn (см. примечание, стр. 231). Наличие полиднсперсности по плотности весьма усложняет задачу, так как в этом случае дисперсия гауссова распределения состоит из двух независимых членов, требующих их раздельного определения;
а = от -|- ар. (35)
Здесь (Tr — дисперсия, вызванная тепловым движением (т. е. диффузией) макромолекул; (Тр — дисперсия, обусловленная полндиспер-аюстъю плотности.
Только в некоторых частных случаях, когда возможно независимым способом вычислить среднечнсленный молекулярный вес, а затем, пользуясь формулой (34), вычислить от, дисперсию op определяют из выражения (35). Возможность применения такого способа оценки полиднсперсности плотности была показана Суеока [51] для ДНК тимуса теленка. Таким образом, к оценке молекулярного веса методом седнментацнонного равновесия в установившемся градиенте плотности необходимо подходить осторожно. Основной величиной, определяемой этим методом, является плотность исследуемой частицы, которая вычисляется с точностью до 0,001 г/см3. Плотности макромолекул лежат в широком интервале значений: от —1,3 г/мл (для белков), до —1,7 г/мл (для ДНК); РНК при плотности 1,9 г/мл еще седи-ментнрует. При надлежащем выборе растворителя этот метод позволяет исследовать обширный класс веществ. Если в градиенте "плотности находится несколько образцов макромолекул, то достаточно хорошее разрешение полос получается уже прн разности плотностей макромолекул порядка нескольких сотых г/см3. Описанный метод дает возможность получать уникальную информацию о зависимости плотности от химического состава молекулы [50], о механизме репликации ДНК и переносе генетической информации [53, 54], о процессах денатурации и ренатура-ции ДНК [55, 56]. Метод применим также для исследования белков [49, 57] н синтетических полимеров [58]. Наиболее полную
18 Физические методы исследовакич белков
273
информацию о применениях Метода равновесного градиента плотности читатель может найти в обзоре Винограда и Хирс-та [29].
3. Двойное лучепреломление в потоке
Метод двойного лучепреломления (ДЛП) в потоке сочетает в себе оптический и гидродинамический подход к изучению строения макромолекул. В комбинации с другими методами, прежде всего с вискозиметрией, метод ДЛП в потоке широко характеризует исследуемые молекулы, позволяя определить разность главных поляризуемостей молекул, коэффициент вращательной диффузии, жесткость молекулы и другие параметры.
С явлением двойного лучепреломления мы сталкиваемся, изучая тела анизотропные, т. е. такие тела, свойства которых (и в частности, скорость распространения света) зависят от направления приложенного воздействия. Таковы, например, почти все кристаллы, волокнистые и слоистые структуры, такие, как асбест, слюда.
Анизотропия может быть создана и в телах изотропных, свойства которых одинаковы во всех направлениях. Так, анизотропия обнаруживается в упруго деформированных телах, в растянутых полимерных пленках, в некоторых жидкостях при их течении.
Предыдущая << 1 .. 100 101 102 103 104 105 < 106 > 107 108 109 110 111 112 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама