Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 27

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 126 >> Следующая

Наряду с контрастированием оттенением металлами и использованием широко распространенного метода реплик разработаны специфические методы контрастирования, применяемые главным образом в биологии. Широкое применение получил метод избирательного «окрашивания» тканей, тонких срезов и отдельных частиц и молекул солями тяжелых металлов, а также метод так называемого негативного контрастирования.
К специфическим особенностям электронной микроскопии в биологии относится также большая вероятность возникновения артефактов, т. е. внесенных в структуру объекта искажений его реальной формы. Это связано, с одной стороны, с процессом фиксации и высушивания, с другой — с процессом контрастирования. Для обнаружения артефактов и предотвращения их необходимы тщательный анализ полученного изображения и сравнение полученных данных с результатами других исследований.
71
б. Пленки-подложки для препаратов
Биологические макромолекулы для исследования их в электронном микроскопе размещаются на тончайших пленках-подложках. В свою очередь, опорой для этих пленок служат специальные сетки, изготовленные из меди электролитическим способом или сплетенные из тонкой проволоки. Те же электроны, которые формируют изображение исследуемых объектов, взаимодействуют и с пленкой-подложкой. Поэтому, если толщина пленки относительно велика или материал, из которого она изготовлена, сильно рассеивает электроны, контрастность изображения помещенного на ней объекта резко ухудшается. Материал пленки должен быть механически прочным, обладать хорошей теплопроводностью и стойкостью к электронной бомбардировке. Иногда препараты, расположенные на пленке-подложке, подвергаются специальной обработке. В этих случаях к пленке предъявляют дополнительные требования химической стойкости.
Следует отметить еще одну важную особенность пленок-подложек. При исследовании молекул биополимеров поддерживающая пленка в силу свойств своей поверхности (гидрофильность или гидрофобность, наличие заряда) может оказывать существенное влияние на их конфигурацию. Это необходимо учитывать при выборе подложки или трактовке результатов.
В практике электронномикроскопических исследований биологических макромолекул чаще всего используются коллодиевые и углеродные пленки. Формваровые и кварцевые пленки, одно время широко распространенные, употребляются редко. Некоторые свойства пленок-подложек приведены в табл. 1. В специальных случаях, например при исследовании молекул нуклеиновых кислот, используются подложки с особыми свойствами, о которых будет сказано в дальнейшем.
Таблица 1
Некоторые свойства пленок-подложек [12]
Пленка Прозрачность по отношению к электронам Механическая прочность Стойкость к электронной бомбардировке Химическая стойкость
Коллодиевая Большая Низкая Низкая Низкая
Углеродная Средняя Высокая Высокая Очень высокая
Кварцевая Малая Средняя Средняя Высокая
Коллодиевые пленки-подложки просты в изготовлении. Чтобы их получить, пользуются 0,5—2%-ным раствором коллодия в амилацетате. Каплю такого раствора наносят на поверхность воды, налитой в чашку диаметром около 20 см (рис. 1). Капля быстро растекается, и после испарения амилацетата образуется тонкая пленка. Уровень воды в чашке постепенно понижают, и пленка опускается на пластинку с сеточками, помещенную на дне
72
сосуда. Известны и другие способы изготовления коллодиевой пленки [10]. Пленки из формвара получить труднее, так как его растворители (диоксан, дихлорэтан, хлороформ) не растекаются по поверхности воды. В этом случае каплю 0,1—0,2%-ного раствора наносят на край чистой стеклянной пластинки и дают ей возможность растечься по всей поверхности. Отделить образовавшуюся пленку от стекла можно в воде [10].
Углеродные, кварцевые пленки и пленки из окиси кремния получают испарением соответствующих материалов в вакууме. Наибольшими преимуществами обладают углеродные пленки. Техника изготовления проста и имеет много общего с изготовлением углеродных реплик.
Ранее мы отмечали, что качество изображения объекта зависит от толщины пленки-подложки. Уменьшение толщины пленки снижает ее механическую прочность. Слишком тонкая пленка будет разрываться в процессе препарирования или под влиянием пучка электронов. Тонкими пленками можно пользоваться, если применять в качестве дополнительной опоры дырчатые пленки, изготовленные из коллодия и укрепленные слоем углерода.
Известно несколько способов [10] получения дырчатых пленок. Простейшим из них является метод Хаксли [ІЗ] в модификации В. А. Марихина и Л. П. Романовой [14]. Он основан на том, что при быстром испарении растворителя из раствора коллодия, нанесенного тонким слоем на поверхность стекла, в пленке образуются мелкие сквозные отверстия, размер которых можно регулировать изменением процентного содержания коллодия в растворе. В 0,2—0,3%-ный раствор коллодия в ацетоне или амилацетате погружают чистое стекло. Затем его вынимают и сушат в вертикальном положении. После испарения растворителя на стекле остается голубовато-белая пленка. Ее тщательно счищают с краев и отделяют от поверхности стекла погружением последнего в воду. Понижая уровень воды, в сосуде, плавающую на поверхности пленку опускают на сеточки, размещенные на дне сосуда. После высушивания и контроля качества дырчатой пленки в электронном микроскопе ее укрепляют с одной или с двух сторон слоем распыленного в вакууме углерода. В некоторых лабораториях после нанесения слоя углерода коллодий удаляют, растворяй его амилацетатом.
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама