Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 31

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 126 >> Следующая

В тех случаях, когда по длине тени оценивают высоту объекта, важно-точно знать угол, под которым производится оттене-ние. Для увеличения точности можно пользоваться сферическими частицами латекса полистирола, наносимыми на подложку для оттенения вместе с препаратом. Непосредственное измерение на микрофотографии диаметра частиц латекса и длины тени от них позволяет установить угол, под которым происходило оттенение препарата на данном участке подложки.
Метод углеродных реплик с предварительным оттенение м. Метод реплик заключается в том, что рельеф поверхности объекта воспроизводится при помощи тонкой пленки, которая затем исследуется в электронном микроскопе. Существуют два основных способа изготовления реплик — одноступенчатый и двухступенчатый. При одноступенчатом способе исследуемый образец покрывают слоем вещества, передающим рельеф поверхности и образующим после отделения от образца реплику. При двухступенчатой методике с образца первоначально делают так называемый промежуточный отпечаток, с которого затем снимают реплику. Последний способ используется главным образом при исследовании поверхности массивных объектов в металловедении [6, 7, 12].
Одноступенчатый способ изготовления реплик получил широкое распространение при исследовании биологических препаратов. В этом случае в качестве материала пленки, воспроизводящей рельеф, используют формвар или коллодий (если не требуется высокое разрешение) и напыленные в вакууме слои углерода или кварца (если необходимо изготовить реплики с высоким разрешением). Мы будем рассматривать так называемые
б Физические метопы исследования белков
18
углеродные реплики с предварительным оттенением, которые просты в изготовлении и являются, по-видимому, наиболее перспективными.
Для изготовления напыленных реплик используют те же вакуумные установки, что и для контрастирования оттенением. Испарение углерода проще всего производить термическим способом, который заключается в том, что электрический ток пропускают через два контактирующих между собой графитовых стержня. Одному из них придается форма острия (см. рис. 4, в). В месте контакта происходят интенсивный нагрев и испарение графита.
Чтобы обеспечить необходимую контрастность, реплики оттеняют. Если металл напыляют непосредственно на исследуемый образец, а затем наносят слой углерода, то образуется углеродная реплика с предварительно оттененного препарата или, как ее иногда называют, предварительно оттененная реплика (см. рис. 3, в). При использовании таких реплик структура исследуемого объекта передается наиболее точно, так как оттеняется непосредственно его поверхность.
В данном случае термин «реплика» не совсем точен, так как здесь углеродная пленка не служит для передачи рельефа исследуемой поверхности, а лишь несет на себе слой оттеняющего металла. После того как препарат оттенен и на него нанесен слой углерода, состояние препарата (если последний слабо рассеивает электроны) не будет сказываться на качестве изображения. Наблюдаемое в электронном микроскопе .изображение BTM не изменится, например, если полученная углеродно-металлическая пленка будет предварительно обработана веществом, растворяющим вирус. Таким образом, в этом отношении функции, выполняемые обычной репликой, полностью сохраняются. Мы будем пользоваться термином «предварительно оттененная реплика», помня о сделанных здесь замечаниях.
Негативное контрастирование. Если частицы исследуемого объекта, например вирусы или отдельные белковые молекулы, находятся на пленке-подложке в тонком слое аморфного вещества высокой плотности, то на экране микроскопа они будут выглядеть как светлые объекты на темном фоне. В этом я заключается принцип «негативного» контрастирования.
Впервые возможность негативного контрастирования была показана Холлом [31] и успешно использована Хаксли {32] при исследовании строения ВТМ. Бреннер и Хорн [33] усовершенствовали методику и выявили при ее помощи детали строения бактериофага Т2. В настоящее время эта методика широко используется для контрастирования различных вирусов [34—39], рибосом [40—42] и крупных белковых молекул [43—46].
Выбор веществ для негативного контрастирования определяется целым комплексом требований. Это вещество должно
82
иметь высокую плотность и быть стойким к воздействию электронного пучка. После его высыхания на подложке должен создаваться аморфный слой. Вещество 'использовать нельзя, если при взаимодействии с ним строение исследуемого объекта нарушается.
Наиболее распространено контрастирование 2%-ным водным раствором фосфорновольфрамовой кислоты (ФВК), доведенным до необходимого значения pH добавлением KOH или NaOH. Микрофотография ВТМ, контрастированного ФВК, приведена на рис. 6. Примерно такое же контрастирующее действие оказывают вольфрамат натрия и молибденовокислый аммоний. Микрофотография вируса костра безостого, контрастированного 'молибденовокислым аммонием, показана на рис. 7.
Ниже приведены некоторые вещества, используемые для негативного контрастирования.
Иногда вещества, создающие негативный эффект, способны выявлять его строение и другим способом. Так, уранилацетат или уранилнитрат выявляют место расположения нуклеиновой кислоты. Если в процессе препарирования ионы уранила проникают внутрь головки фага, то они взаимодействуют с уложенной там молекулой нуклеиновой кислоты, увеличивая плотность. Капсула вируса в этом случае выглядит не светлой, а темной. В противовес негативному, такое контрастирование иногда называют позитивным.
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама