Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 32

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 26 27 28 29 30 31 < 32 > 33 34 35 36 37 38 .. 126 >> Следующая

Негативное контрастирование можно осуществлять, используя различные приемы. Чаще всего 1—2%-ный водный раствор контрастирующего вещества, предварительно доведенный до нужного значения pH, смешивают с суспензией исследуемых частиц. Полученную смесь или пульверизируют на пленку-подложку, или наносят пипеткой (небольшую каплю) и тут же отсасывают ее фильтровальной бумагой. Так как пульверизирование способствует деформации частиц .и создает худшие условия для распределения контрастирующего вещества на подложке [8], второй способ предпочтительнее. К тому же при пульверизировании возникают дополнительные трудности, если работу ведут с ,инфекционным материалом.
Другой способ —это нанесение контрастирующего вещества на объект, который уже находится на пленке-подложке. В этом
Вещество
Безводная плотность
Аммоний молибденовокислый
Уранилацетат .......
Уранилнитрат .......
Уранилформиат.......
Фосфорновольфрамовая кислота Вольфрамат натрия .....
2,89
3,7
3,69
3,8
4,2
6*
83
Рис. 6. Вирус табачной мозаики, контрастироваиный ФВК
а — схематическое изображение ВТМ, находящегося в слое контрастирующего вещества; левая частица просматривается вдоль оси, правая — сбоку; б, в — втм, контрастироваиный фвк
Рис. 7. Вирус костра безостого, контрастированный молибдаточ аммония
случае сокращается до минимума время взаимодействия контрастирующего вещества с препаратом и меньше вероятность разрушения последнего.
Схематическое изображение частиц ВТМ, находящихся в слое ФВК, показано на рис. 6, а. Видно, что изображение частицы на экране или микрофотографии при таком методе контрастирования будет зависеть от степени ее погружения в слой плотного вещества. Частица, находящаяся в ФВК целиком, вся принимает участие в создании изображения. В этом случае внутренняя полость BTM заполняется ФВК, которая проникает также в «пустые» частицы сферических вирусов, занимая объем, предназначенный для нуклеиновой кислоты. Может быть и другой вариант, когда вирус погружен в ФВК неполностью. Тогда изображение будет создавать только некоторая его часть, например удаленная от подложки или близкая к ней. Иногда при исследовании спиральных структур и некоторых вирусов с ико-саэдрическими капсулами важно знать, какая сторона контра-стируется и создает изображение. Чтобы это установить, прибегают к различным приемам. Так, исследуя капсулу вируса папилломы человека, Клуг и Финч [37] просматривали стереопары микрофотографий частиц, контрастированных с одной стороны. Просмотр показал, что слой контрастирующего вещества (ФВК) выглядит расположенным между находящейся на переднем плане подложкой и изображением вирусной частицы. Так как препарат помещали в микроскопе подложкой в сторону источника электронов, такая картина свидетельствовала, что изображение возникает благодаря взаимодействию с ФВК стороны частицы, обращенной к подложке.
Оценка характера контрастирования при помощи стереопар носит в известной степени субъективный характер. В дальнейшем эти же исследователи использовали [39] более надежный прием. Они наклоняли образец на угол от 20 до 45°. В этом случае на микрофотографиях одного и того же участка до и после наклона можно было отчетливо обнаружить изменения в изображении частиц (рис. 8). Так как исследовались белковые капсулы вируса папилломы кроликов, характеризуемые икосаэдри-ческой симметрией, то отмечалось перемещение отдельных морфологических единиц (так называемых пентамеров). Зная, как проходит ось вращения образца, можно было определить, какой стороне капсулы эти морфологические единицы принадлежат. Было показано, что там, где получают изображение с одной стороны частицы, эта сторона преимущественно та, которая обращена к подложке. Пропорция частиц, контрастированных с одной стороны, составляла 1 %. При этом контрастирование осуществлялось по методике, когда каплю суспензии вирусов наносили на тонкую углеродную пленку, затем наносили 1 %-ныи раствор ФВК и жидкость отсасывали с края сетки.
85
¦в
Вид сбоку
а
б
б
Рис. 8. Частица, контрастировалиая негативным методом (а), и схема (б), показывающая, как изменяется на проекции сферы положение какой-либо характерной точки (отмеченной крестиком), расположенной на ее поверхности, в зависимости от изменения направлении (А или В) просмотра
І — пучок электронов; 2 — подложка; 3 — контрастирующее вещество; 4 — частица; 5 — фотопластинка
Чтобы иметь возможность легко определить направление оси наклона, на противоположную сторону сетки (т. е. ближайшую к источнику электронов) наносили ВТМ, также контрастироваиный негативным методом. И тот, и другой вирусы можно было наблюдать одновременно. Ось поворота была перпендикулярна направлению смещения изображений «верхнего» и «нижнего* вирусов относительно друг друга.
В некоторых случаях наложение изображений различных участков объекта, контрастнрованного негативным методом, друг на друга, приводит к формированию весьма своеобразных картин. Например, при помощи электронной микроскопии было обнаружено, что при реполимеризации белок BTM в определенных условиях способен создавать трехмерные кристаллы [47]. На микрофотографиях кристаллов была чаще всего видна решетка с квадратными ячейками. Кристаллы такого же характера, но с другими параметрами решетки были обнаружены и при реполимеризации белка вируса штриховатой мозаики ячменя [48} (рис. 9, а). Анализ микрофотографий позволил установить, что составными частями этих кристаллов, элементами, из которых они построены, -являются диски, образованные из молекул белка вирусов. На рис. 9, б показана схема, демонстрирующая, как именно возникает видимость квадратной решетки.
Предыдущая << 1 .. 26 27 28 29 30 31 < 32 > 33 34 35 36 37 38 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама