Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 33

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 27 28 29 30 31 32 < 33 > 34 35 36 37 38 39 .. 126 >> Следующая

86
Она образуется благодаря наложению друг на друга изображений белковых дисков, расположенных в объемноцентрироваииой тетрагональной решетке.
Оценивая -метод негативного контрастирования, необходимо отметить большую его эффективность, особенно при исследовании вирусов. Преимущество этого метода наглядно демонстрирует сравнение микрофотографий ВТМ, оттененного (см. рис. 3, а, б) и контрастированиого ФВК (см. рис. 7, б, в) [8]. Если в первом случае детали строения капсулы обнаружить ие удается, то негативное контрастирование выявляет в капсуле внутренний канал и белковые субъединицы, из которых она построена.
87
Реальность выявляемых при помощи негативного контрастирования структур прекрасно подтверждается данными, полученными другими методами (например, рентгеноструктурным анализом, электронной микроскопией оттененных и «окрашенных» вирусных частиц). Из экспериментов с вирусом герпеса, адено'-вирусом, миксовирусами видно, что они не теряют инфекционное™ после смешивания с ФВК. Электронная микроскопия вируса герпеса [38] показала некоторое разрушение капсулы вируса только при очень низких значениях pH ФВК — 4,2. Известно также [44], что белки, высушенные в каплях ФВК и затем снова увлажненные, в большинстве своем не деструктированы, не нарушается их ферментативная активность. Вместе с тем влияние взаимодействия ФВК с отдельными молекулами белка установлено еще недостаточно. Недавно опубликована работа, в которой спектрофотометрически и при помощи аналитического центрифугирования исследовали взаимодействие ФВК с молекулами гемоглобина [49]. Оказалось, что при pH 5—7 ФВК сильно взаимодействует с гемоглобином, о чем свидетельствуют быстрое увеличение коэффициента седиментации и резкий спад поглощения. В области pH 7—9,5 это взаимодействие меньше, но молекулы заметно агрегируют.
Позитивное контрастирование. За последние годы получило широкое распространение избирательное «окрашивание» срезов водорастворимыми слоями тяжелых металлов с целью выявления участков, занимаемых нуклеиновой кислотой. Физическая сущность такого окрашивания заключается в присоединении ионов тяжелых, сильно рассеивающих электроны металлов к молекулам нуклеиновой кислоты. Успехи, достигнутые в этой области, вызвали применение аналогичных методов окрашивания к вирусам [13], рибосомам [40] и отдельным молекулам нуклеиновой кислоты [21, 50, 51]. Как мы уже упоминали, такое контрастирование иногда называют позитивным.
Рассмотрим применение позитивного контрастирования на примере небольших «сферических» вирусов [13]. Каплю суспензии вирусов помещают на покрытую углеродной пленкой сетку. Сетку с пленкой выдерживают в течение нескольких часов в 2%-ном водном растворе уранилацетата, после чего промывают водой. В результате такой обработки центральная часть вирусов, где расположена их нуклеиновая кислота, становится видимой в электронном микроскопе и на микрофотографии выглядит как темное пятно. Если часть уранилацетата после промывания остается на пленке-подложке и окружает исследуемые частицы, создается эффект негативного контрастирования, благодаря чему выявляется и белковая капсула.
«Окрашивание» уранилацетатом было применено для контрастирования отдельных молекул ДНК [21, 50, 51]. Тем или иным способом ДНК наносили на углеродную пленку, поддер-
88
живаемую сеткой. Сетку с пленкой погружали в 1—2%-ный водный раствор уранилацетата (pH 5). После выдержки в течение различного времени сетку вынимали и промывали водой. Описанная методика выглядит примитивной. Однако ее развитие сделало возможным избирательное окрашивание отдельных нуклеотидов. Этого вопроса мы коснемся в следующем разделе.
г. Исследование молекул нуклеиновых кислот
В связи со спецификой нуклеиновых кислот при приготовлении образцов большре значение наряду с их контрастированием приобретают способ нанесения препарата на подложку и физические свойства этой подложки. Поэтому изложение методики исследования нуклеиновых кислот мы выделили в отдельный параграф.
После высушивания капли разбавленного раствора на коллодиевой, формваровой или углеродной пленке нуклеиновая кислота обычно образует большие агрегаты, что делает невозможным исследование отдельных ее молекул. Довольно широко распространен способ нанесения раствора нуклеиновой кислоты пульверизацией на поверхность только что расщепленной пластинки слюды. Чтобы контрастировать молекулы и получить возможность их исследовать в электронном микроскопе, применяют предварительно оттененные реплики. Свежий скол слюды имеет идеально гладкую поверхность, обеспечивающую равномерный фон при оттенении молекул. Нуклеиновую кислоту, растворенную в летучем буфере нужного состава, например аце-татно-аммониевом, при помощи пульверизатора наносят на поверхность слюды (рис. 10, а). После оттенения металлом {рис. 10, б) наносят слой углерода (рис. 10, в). Слюду с нанесенной на нее углеродно-металлической пленкой постепенно погружают в воду, как это 'Показано на рис. 10, г, и пленку отделяют от ее поверхности. Затем уровень воды постепенно понижают, и пленка опускается на сетки, предварительно положенные (на керамическом или металлическом диске с отверстиями) на дно воронки.
Предыдущая << 1 .. 27 28 29 30 31 32 < 33 > 34 35 36 37 38 39 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама