Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 34

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 28 29 30 31 32 33 < 34 > 35 36 37 38 39 40 .. 126 >> Следующая

При работе с высокополимерной ДНК по описанной методике на микрофотографиях отмечается образование участков с повышенной плотностью, от которых в радиальных направлениях расходятся жгуты и одиночные молекулы (рис. 11). Такое распределение связано с высыханием микрокапли раствора на подложке [10, 21, 50].
Трактуя микрофотографии молекул нуклеиновых кислот, контрастированных оттенением, необходимо принимать во внимание направление оттенения. На этих микрофотографиях направление оттенения не всегда четко видно. Это иногда создает неверное представление о поперечных размерах молекул.
89
Рис. 10. Методика приготовления предварительно оттененных реплик с препаратов типа нуклеиновых кислот, вирусов, фагов, рибосом и т. п. с использованием в качестве подложки свежего скола слюды
а — нанесение препарата на поверхность
слюды; б — оттенение металлом; в — нанесение слоя углерода; г—отделение углеродно-металлической пленки от поверхности слюды; 1 — частицы препарата; 2 — выходное отверстие пульверизатора: 3 — пластинка слюды; 4—источник испаряющегося металла; 5 — слой металла; б —графитовые стержни; 7 — слой углерода; 8 — сетки; 9—диск с отверстиями; 10—воронка, заполненная водой; // — трубка с зажимом
На рис. 12, а, б показаны микрофотографии молекул ДНК, оттененных в различных направлениях по отношению к оси молекул. На рис. 12, а направление оттенения перпендикулярно оси. Длина тени равна примерно 200 А. Учитывая, что отношение длины тени к высоте объекта в данном случае равно 10:1, можно рассчитать диаметр молекулы, который равен примерно 20 А. На рис. 12, б показан случай, когда направление оттенения на большом участке длины почти совпадает с осью молекул. В таких условиях представления о форме и размерах молекулы получить нельзя.
Основным недостатком описанной выше методики является то, что пульверизация может вызвать деградацию молекул иук-
90
Рис. 11. ДНК из селезенки крыс. Углеродная реплика с предварительным оттенением сплавом платины с палладием. Отношение длины теин к высоте объекта 10 : 1
Рис 12. ДНК из селезенки крыс. Углеродная реплика с предваритель-ным оттенением сплавом платины с палладием. Стрелками показано направление оттенения. Отношение длины тени к высоте объекта 10: J а — направление оттенения перпендикулярно молекуле; б — оттенение произведено почти вдоль молекулы
Рис. 13. ДНК фага Сд. Использован метод извлечения молекул из раствора при помощи заряженной пленки. Наблюдаются длинные, ориентированные параллельно друг другу молекулы. Отношение длины тени к высоте объекта
леиновых кислот. Аналитическим центрифугированием и исследованием вязкости препаратов высокополимерной рибонуклеиновой кислоты (РНК) до и после пульверизации установлено уменьшение молекулярного веса РНК [23]. Степень деградации зависит от режима пульверизации и типа пульверизатора.
Таким образом, использование в качестве подложки поверхности слюды в сочетании с нанесением препарата пульверизированием при всех достоинствах этого метода обладает тем недостатком, что не позволяет наблюдать длинные молекулы (типа ДНК) неразрушенными. Поэтому в настоящее время все большее распространение получают другие, более «мягкие» методы нанесения препарата.
Один из таких методов предложен Биром [24]. В качестве подложки в этом случае в первоначальном варианте использовали сополимер стирола и винилпиридина (40%). Предметной сеткой, покрытой пленкой такого сополимера, проводят по поверхности раствора ДНК- Молекулы ДНК в растворе заряжены отрицательно за счет ионизированных фосфатных групп. Пленка сополимера заряжена положительно, и молекулы ДНК прилипают к ее поверхности. Благодаря движению пленки возникает ориентация молекул в направлении ее перемещения (рис. 13). Оттенение в этом случае производится перпендикулярно направлению перемещения. Величина положительного заряда пленки пропорциональна количеству винилпиридина в ней и уменьшается с увеличением pH раствора, в котором находится ДНК- При помощи такой методики удалось наблюдать молекулы ДНК фага Т2 длиной до 50 мк [52] и ДНК фага Сд длиной до 38 мк [26]. Тонкую пленку из сополимера получить трудно, поэтому вместо нее в последнее время используют обычную углеродную пленку [25, 27]. При сохранении остальных приемов в этом случае также можно получить микрофотографии длинных ориентированных молекул [53].
Методика Вира не исключает полностью возможность разрушения молекул. Они в этом случае вытянуты на подложке в одном направлении и при большом молекулярном весе достигают длины нескольких десятков микрон. Чтобы получить микрофотографию одной такой молекулы целиком, работая даже при сравнительно низком увеличении, приходится производить серию снимков, что представляет известное неудобство.
В настоящее время большое распространение получила методика, впервые предложенная Кляйншмидтом и Цаном [54]. Эта методика основана на взаимодействии нуклеиновой кислоты с низкомолекулярными белками и способности этих белков образовывать пленку на поверхности жидкости. Физико-химия образования такой пленки подробно описана в работе Трурни-та [55],
Предыдущая << 1 .. 28 29 30 31 32 33 < 34 > 35 36 37 38 39 40 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама