Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 36

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 126 >> Следующая

94
-.1"-.'«!..'" *•*
Рис. 19. ДНК фага Т2. Обработка по методике Кляйншмидта с последующим оттенекием вращающегося образца. Молекулы частично денатурированы. На одной из них наблюдается расхождение двухспиральной структуры на полинуклеотидпые цепочки, одна из которых разорвана. На койне другой молекулы виден клубок, образованный полинуклеотидными
цепочками
Рис. 20. Фаг Т2, выбросивший ДНК
взвеси частиц в воде прибавляли 0,15 мл раствора цнтохрома с (концентрация 400 мкг/мл) и 0,4 мл смеси наносили на поверхность дистиллированной воды. Микрофотография частицы фага, окруженной выброшенной ДНК, показана на рнс. 20.
До сих пор мы рассматривали контрастирование молекул нуклеиновой кислоты оттенением. Эта методика контрастирования нуклеиновых кислот пока наиболее распространена. Вместе с тем она имеет н свои недостатки. В силу специфики метода выявление тонкой структуры молекул ограничивается величиной зерна напыленного слоя металла. Между тем исследование деталей строения молекул нуклеиновых кислот, например их вторичной структуры, доступно для электронномикроскопнческих исследований. Чтобы это можно было осуществить, необходимо разработать новые методы контрастирования.
Контрастирования ДНК можно достигнуть присоединением к ее молекулам нойон тяжелых металлов. В рассмотренном выше исследовании [56] наряду с оттенением металлами препараты нуклеиновых кислот, полученные методом белковой пленки, контрастировали солями тяжелых металлов. Для этого высушенные сетки с белковой пленкой помещали на поверхность 2%-ного раствора уранилацетата (pH 5,0) пленкой вниз на 10— 15 мин. После высушивания препараты иссследовалн в микроскопе при увеличении 25 000. Толщина молекул нативной ДНК при этом способе контрастирования составляет 20—25 A, т. е. соответствует истинной толщине (рнс. 21).
Контрастирование уранилацетатом пока не дает сколько-нибудь ощутимых преимуществ по сравнению с оттенением в отношении выявления деталей строения. Никаких признаков упорядоченной внутренней структуры молекул на микрофотографиях наблюдать не удаегся. В одной из работ [48], проведенной на очень высоком экспериментальном уровне, кроме уранилацетата использовали н другие окрашивающие нуклеиновую кислоту вещества. Однако и здесь получить какие-либо данные о вторичной структуре молекул не удалось.
Контрастирование молекул присоединением к ним ионов тяжелых металлов продолжает разрабатываться. В связи с этим интересны работы Вира с сотрудниками [50, 51, 59]. Ими разрешается задача еще более важная, чем исследование вторичной структуры молекул нуклеиновых кислот, а именно определение последовательности нуклеотидов, т. е. первичной структуры. До сих пор это делается химическими методами, причем исследователям приходится сталкиваться с большими трудностями. Поэтому значение работ группы Вира трудно преувеличить.
Интересно проследить этапы этих исследований. Прежде всего решалась проблема извлечения нз раствора и нанесения на подложку целой молекулы нуклеиновой кислоты. Это оказалось сделать сравнительно просто, применив описанные выше методы.
95
Контрастирование осуществлялось присоединением к молекуле ионов тяжелых металлов. Задача в данном случае осложнялась тем. что нужно было выявить нуклеотиды только определенного сорта, а не все. Поэтому метящие группы должны избирательно присоединяться к определенного вида нуклеотндам, обладающим достаточной рассеивающей способностью, чтобы их можно было различить при помощи электронного микроскопа. Вместе с тем размеры присоединяемой группы должны быть малы по сравнению с расстоянием между основаниями в нуклеотидах.
Как известно, молекула ДНК в подавляющем большинстве случаев представляет собой двойную спираль. Если даже представить себе гипотетический случай, когда соответствующие метящие группы найдены, нх изображения будут накладываться одно на другое. Поэтому исследовались не натнвные молекулы, а одиночные полинуклеотндные цепочки. В этом случае расстояние между нуклеотидами будет выглядеть одинаковым и равным 6 A. Появилась реальная возможность увидеть группы тяжелых атомов, присоединенных к соседним нуклеотндам.
В настоящее время ведутся работы по разрешению наиболее трудной задачи — подбору избирательно присоединяющихся1 метящих групп. Для этих целен исследования проводятся с искусственными полннуклеотидами [51]. Одноцепочечные нитевидные молекулы этих полимеров наносят на углеродную пленку. На эту же подложку наносят сферы латекса н производят оттенение. После этого осуществляют окрашивание ионами тяжелых металлов. При просмотре препаратов, благодаря оттенению, можно обнаружить нитевидные молекулы непосредственно по изображению на экране. Это существенно облегчает исследование. На микрофотографиях на участках, экранированных от оттенения сферами латекса, наблюдаются молекулы полимеров, выявленные в результате присоединившихся к ним ионов тяжелых металлов. Опыты показали, что HAuCl4 окрашивает полнА, полиГ, полиЦ н не взаимодействует с полиУ [51].
Проведенные Бнром и другими исследования взаимодействия HAuCЦ с мононуклеотндами свидетельствуют о том, что комплекс, образуемый с адениловой кислотой, состоит из одного иона AuCl4 на одну молекулу адениловой кислоты. С другой стороны, было найдено, что урндиловая кислота с этим ионом не взаимодействует. Это согласуется с результатами электронномикроскопнческих исследований.
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама