Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 37

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 126 >> Следующая

Работы по избирательному окрашиванию нуклеиновых кислот являются примером таких исследований, когда результатов можно добиться, только работая на предельном разрешении микроскопа первого класса. В целом же электроиномнкроско-пическне исследования нуклеиновых кислот хорошо иллюстрирует многообразие подходов при изучении одного и того же объекта методом электронной микроскопии.
96
2. Исследование ультратонких срезов
Если в электронный микроскоп рассматривать относительно толстые объекты, как, например, клетки бактерий, растений и животных, то в результате наслоения проекций одних внутриклеточных структур на другие мы не сможем детально разобраться во внутреннем строении таких объектов, мы сможем рассмотреть лишь внешнюю их форму. Кроме того, проходя через толстые объекты, электроны будут их разрушать. Для того чтобы разобраться во внутренних структурных особенностях различных клеток (а иногда и крупных вирусов), необходимо изучение их на ультратонких срезах. При таком исследовании рассматриваются тонкие сечения структур, что, с одной стороны, снимает их маскировку лежащими сверху структурами, а с другой — такие препараты более устойчивы к бомбардировке электронами.
Судить о трехмерной структуре объекта, изучая срезы, довольно трудно, но, исследуя морфологию клеток, рассеченных в разных плоскостях, или восстанавливая общую их структуру при помощи исследования серийных срезов, можно получить полное и точное представление об истинных размерах и форме всех компонентов клетки.
Исследование ультратонких срезов биологических объектов открыло новую страницу в биологии. За последние годы в изучении ультраструктуры клеток были достигнуты огромные успехи, на основе которых мы теперь имеем довольно полное представление о тонком строении клеток и составляющих их частей (рис. 22—27).
Оказалось, что для успешного изучения клеток и тканей необходимо иметь срезы, толщина которых должна быть в пределах 300—600 А, т. е. в 100 раз меньше толщины срезов, которые применяются в обычной световой микроскопии. В последнем случае ткани пропитываются парафином, но из-за его мягкости и хрупкости из таких объектов невозможно получить ультратонкие срезы. Поэтому электронная микроскопия не имела успехов до тех пор, пока не были найдены новые заливочные материалы — пластмассы, такие, как метакрилаты, эпоксидные смолы и т. д.
Заливке объектов в такие среды должны предшествовать процессы фиксации и обезвоживания материала, чтобы эти вещества свободно пропитали всю ткань.
Первым необходимым звеном в процессе изучения объектов на ультратонких срезах является фиксация клеток.
а. Фиксация
Мы пока еще не можем при помощи электронного микроскопа проникать в структуру внутренних компонентов живых клеток, тем более невозможно изготовить из них срезы нужной толщины.
7 Физические методы исследования белков 97
Поэтому приходится прибегать к такой химической или иной обработке клеток, при которой они убивались бы, но при этом ие происходило бы изменений структур, их размеров, молекулярного строения, дислокации веществ или их потери. К сожалению, применяющиеся в настоящее время химические вещества для фиксации, стабилизации клеток и их компонентов одновременно всем этим требованиям не удовлетворяют. Убивая клетку, они убивают и ее ферменты, денатурируют белки или растворяют их, вызывая ряд изменений в клеточных структурах. Некоторые фиксаторы сохраняют одни клеточные компоненты, но при этом изменяются другие; иные фиксаторы, не изменяя сильно химизма одних структур клеток, приводят к изменению пли даже к потере других. Пока что не иайдеп «идеальный» фиксатор, который сохранял бы в пативном состоянии химизм и структуру клеток.
Однако, несмотря на такую, казалось бы, пессимистическую предпосылку, все же были достигнуты большие успехи в ультраструктурном изучении клеток, благодаря применению различных химических веществ для фиксации. Сравнительный анализ результатов воздействия разных фиксаторов и физических обработок на клетки позволяет говорить о принципах организации клеток, которые существуют и in vivo.
Наиболее удачными фиксаторами в электронной микроскопии оказались вещества, которые, вступая в реакцию с белками и липндами, связывают их и стабилизируют. Самыми распространенными нз них являются четырехокись осмия, формалин и перманганат калия.
Четырехокись осмия (OSO4) удачио используется в качестве фиксатора для клеток в электронной микроскопии ие только потому, что она хорошо сохраняет клеточные компоненты, ио и потому, что, связываясь с ними, одновременно их и «окрашивает». При этом осмий, осажденный на структурах, в силу своего большого атомного веса отклоняет электроны и тем самым как бы контрастирует структуры.
Взаимодействие четырехокиси осмия как сильного окислителя с клеточными структурами очень сложно и многообразно. Она интенсивно связывается с белками, со многими аминокислотами, мало связывается с РНК и почти не реагирует с ДНК [60]. Четырехокись осмия может соединяться с аминогруппами в полипептидных цепочках и тем образовывать между ними связи, что определяет прекрасную сохранность белковых структур. Но при продолжительном воздействии из-за глубокого окисления такие связи рвутся и белки могут быть вымыты при дальнейшей обработке в водных средах. Было показано [61], что в результате длительной фиксации в четырехокиси осмия может быть потеряно до 22,6% белка из тканей и еще до 12% при дальнейшем обезвоживании. В ненасыщенных жирных кислотах четырехокись осмия образует прочные связи между соседними цепоч-
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама