Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 39

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 126 >> Следующая

б. Заливка
Для изготовления ультратонких срезов толщиной 300— 600 A необходимо, чтобы заливочный материал обладал нужной твердостью, эластичностью и другими свойствами, очень важными для исследования срезов в электронном микроскопе. Чаще всего для этих целей используются некоторые пластические массы (метакрилаты, эпоксидные смолы, полиэфирные смолы), а также желатина. Поэтому весь процесс обработки объекта после фиксации находится в зависимости от того вещества, в которое будет заключен материал. Чаще всего для приготовления ультратонких срезов в качестве заливочного материала используют метакрилаты, которые хорошо смешиваются с большинством органических растворителей и не смешиваются с водой. Следовательно, подобно гистологической заливке в парафин, сначала объект необходимо обработать так, чтобы метакрилат мог полностью его пропитать. Это обычно достигается путем дегид-
101
ратации тканей или клеток при помощи нескольких смен спиртов (метилового или этилового) или ацетона возрастающей концентрации.
Объекты не обнаруживают значительных морфологических различий при обезвоживании в различных средах, за исключением ацетона, который хорошо экстрагирует липиды.
При обезвоживании, так же, как и при фиксации, необходимо соблюдать определенные условия, чтобы исключить появление дополнительных артефактов. Нужно помнить, что в результате этого процесса происходит сжатие объектов (до 30%), вызываемое не только потерей воды, но и экстракцией части материала (особенно липидов в ацетоне). По данным Сильвена [69], ткани теряют после фиксации и обезвоживания 40—60% своего сухого веса. Поэтому обезвоживание необходимо проводить как можно быстрее, с учетом способности применяемого реактива экстрагировать те или иные клеточные компоненты. Обезвоживание должно быть полным, так как недостаточное удаление воды из объекта при заключении его в пластмассу вызывает значительные повреждения в тканях и клетках из-за неравномерной и неполной полимеризации заливочного материала. Резкая смена концентрации спиртов вызывает резкое сжатие объектов. Поэтому целесообразно применять спирты с постепенным увеличением концентрации. Следующим этапом в процессе обработки тканей после обезвоживания является их пропитка и заключение в пластмассы или другие среды.
Используемые для этих целей вещества должны отвечать следующим требованиям: иметь низкую вязкость в мономерном состоянии для того, чтобы свободно проникать в объект; полностью смешиваться с веществом, в котором ведется дегидратация (спирт, ацетон и др.); при полимеризации не должен меняться объем, занимаемый мономером; полимеризованная среда вместе с заключенным в нее объектом должна быть годной для изготовления ультратонких срезов; среда не должна влиять на качество изображения объекта.
Применяемые в настоящее время среды для заливки объектов, к сожалению, всеми этими качествами не обладают. Так, ме-такрилаты могут повреждать объекты, а также сублимируют под лучом электронов и тем самым вносят дополнительные артефакты. Эпоксидные смолы наиболее пригодны для заливок, но очень снижают контрастность изображения [70]. Полиэфиры (Весто-пал W) дают очень твердые блоки и смешиваются только с ацетоном 171]. Заключение в желатин приводит к сжатию объектов 172].
Самым распространенным и легкодоступным способом для заключения объектов в электронной микроскопии является помещение их в метакрилаты. Для этих целей используют я-бутил-метакрилат и я-метилметакрилат — эфиры метакриловой кисло-
102
ты. Они хорошо смешиваются в мономерном (жидком) состоянии с большинством органических растворителей [73]. Метакри-латы легко проникают в ткани, достаточно хорошо обработанные спиртом или ацетоном. Полимеризация их может быть вызвана действием тепла, света, ультрафиолетовым излучением или же химическими веществами-инициаторами.
При полимеризации молекулы мономера образуют короткие (из нескольких десятков молекул) или длинные (из нескольких десятков и сотен тысяч молекул) цепи в зависимости от условий реакции. При полимеризации н-бутилметакрилата образуются мягкие блоки, а при полимеризации н-метилметакрилата—твердые. Таким образом, сочетая разные количества этих двух мономеров, можно получить блоки желаемой твердости. Так, при добавлении 10—20% н-метилметакрилата к я-бутилметакрилату увеличивается твердость блоков и они становятся подходящими для более твердых тканей, таких, как печень и мышцы.
В биологических исследованиях для полимеризации метакри-латов используются главным образом дихлорные перекиси бен-зоила как инициаторы (в литературе их чаще называют катализаторами) полимеризации. После добавления перекиси бензоила полимеризация метакрилатов может происходить и при комнатной температуре, однако этот процесс занимает слишком много времени (несколько суток). Обычно, реакцию полимеризации проводят при температурах 45—60° .в термостатах. Бориско [74] нашел, что повышение температуры при полимеризации метакрилатов до 80° не влияет на качество препаратов, однако оптимальной температурой, при которой процесс полимеризации завершается за 12—18 час, является 60°.
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама