Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 40

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 34 35 36 37 38 39 < 40 > 41 42 43 44 45 46 .. 126 >> Следующая

Процедура заливки объектов довольно проста. После фиксации и обезвоживания они пропитываются в смесях метакрилатов и переносятся в желатиновые капсулы, наполненные мета-крилатами (рис. 29). Капсулы помещают в термостат, где и завершается полимеризация метакрилатов, в которые заключены объекты. Более подробно эти процессы описаны в специальных руководствах [10, 75].
Один из существенных недостатков метакрилатов — повреждение объектов в процессе полимеризации. Это выражается в том, что часть объектов (особенно крупных) набухает и разрушается, особенно на периферии, тогда как в центре объекта клетки почти не изменяются, что особенно мешает в работе с культурами ткани. Повреждения возникают в результате неравномерного и нестабильного затвердевания полимера в присутствии следов воды или при повышенном содержании кислорода. По этим же причинам другое неудобство метакрилатов — появление в блоках пузырьков, часто располагающихся непосредственно на объектах. Для борьбы с полимеризационными повреждениями Бориско предложил, с одной стороны, использовать
103
Рнс. 29. Перенос кусочков ткани из смеси метакрилатов в желатиновые капсулы для полимеризации
метакрилат, предварительно лолимеризованный (предполинер) при температуре 60—80° до сиропообразного состояния, с другой — использовать для последующей полимеризации более высокую температуру — 60°. Дегазация мономеров метакрилата также является мерой борьбы с полимеризационными повреждениями. При добавлении к метакрилатам дивинилбен-зола образуются трехмерные структуры полимера, что предотвращает изменение образцов при полимеризации и делает их более устойчивыми к пучку электронов [76].
За рубежом в качестве заливочных материалов с успехом применяют эпоксидные смолы (Аралдит, Эпон) и полиэфиры (Вестопал W). Для увеличения контрастности изображения объекты при заливке в эпоксидные смолы необходимо дополнительно окрашивать (см. ниже).
Эти приемы заливки объектов страдают общим недостатком, а. именно, объекты необходимо проводить через ряд сред, экстрагирующих различные химические компоненты клетки. Было бы чрезвычайно важно использовать в качестве заливочных сред вещества, хорошо растворимые в воде, но попытки применения таких сред (желатин, аквон) пока не увенчались большим успехом [72, 77],
104
в. Изготовление ультратоиких срезов
Стеклянные ножи, используемые для ультрамикротомирова-ния, не позволяют делать больших площадей срезов из-за своей хрупкости и небольшой поверхности лезвия, годной к резке. С другой стороны, размеры срезов ограничиваются размером сеток-подложек (до 3 мм в диаметре). Кроме того, размер самой ткани, фиксированной для электронной микроскопии, также невелик. И, наконец, напряжения и вибрации, возникающие прн резке объектов, залитых в твердые пластмассы, создали необходимость использовать для изготовления ультратонких срезов очень небольшие площади объектов, составляющие чаще всего несколько десятых долей квадратного миллиметра (вполне возможно получить хорошие срезы площадью 4 мм2 каждый). Чем меньше площадь среза, тем лучше и равномернее будут срезы. Так как наименьшая площадь среза может быть получена с вершины пирамиды, то обычно объект, заключенный в пластмассу, затачивают на пирамиду или призму (рис. 30).
Одним из самых важных моментов при получении ультра-тонких срезов с заточенных блоков клеток и тканей является процесс изготовления ножа для резки. За последние 10 лет было предложено большое число методов приготовления ножей из различных материалов (сталь, стекло, корунд, алмаз).
Рис. 30. Зажатый в держатель блок с заключенным в нем объектом затачивается перед резкой,
105
Рис. 31. Ножи, применяемые для изготовления ультратонких срезов я, 6 — стеклянные ножи; на один из них надета специальная ванночка для жидкости, на поверхности которой .собираются срезы; е — специальный держатель алмазного ножа; 1 — режущий край ножа; 2— алмазный нож
Стеклянные ножи, впервые введенные в практику получения ультратонких срезов Латта и Хартманои [78], нашли очень широкое применение благодаря доступности и значительно меньшей трудоемкости процесса их изготовления. В качестве режущего лезвия стеклянного ножа служит торцевая линия (кромка) скола стекла, произведенного под углом 45—55° (рис. 31). Для этого на полосках или квадратах толстого (4—6 мм) стекла делаются стеклорезом диагональные насечки. Затем такие квадратики разламываются по линиям насечек. Ширина полосок или квадратов стеклянных заготовок обычно бывает 25 мм. Установлено, что наилучшее качество лезвия получается у ножей, изготовленных из сортов стекла с повышенным содержанием кремния.
Для получения ультратонких срезов хорошего качества очень в.ажно, чтобы ножи не имели на своей режущей кромке зазубрин или изъянов. Процент стеклянных ножей, после изготовления пригодных для резки, невелик, их кромка очень хрупка « поэтому их нельзя использовать повторно. Более долговечны и стабильны алмазные ножи [79], имеющие к тому же большую протяженность режущего края (см. рис. 31).
Изготовление ультратонких срезов производится при помощи специальных приборов — ультрамикротомов (обзор конструкции см. [10]). B принципе их работа заключается в том, чтобы в процессе резки равномерно на одинаковую величину подавать объект к ножу. Так как толщина срезов должна быть всего лишь в несколько сот ангстрем, то и подача объекта также должна быть равной этой величине. Такую незначительную подачу можно осуществить, используя либо тепловое расширение
Предыдущая << 1 .. 34 35 36 37 38 39 < 40 > 41 42 43 44 45 46 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама