Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 41

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 126 >> Следующая

106
Рис. 32. Расположение в улътрамикротоме держателя алмазного ножа (J) R образца (2), который движется вперед за счет теплового расширения и одновременно перемещается в вертикальной плоскости (показано стрелкой); S — сетка с пленкой -подложкой, на которую монтируются ультратонкие срезы
металлических стержней, на которых крепится объект, либо точную микрометрическую подачу с последующей редукцией подачи на рычагах. Соответственно этим принципам современные модели ультрамикротомов можно разделить на два типа: с тепловой и с механической подачей. К первому типу относится шведский ультрамикротом Шестранда, универсальный «Ультратом-4800» шведской фирмы LKB, модель австрийской фирмы «Рейхерт», японский микротом JUM-5, советские модели УМД-5, УМД-2 и др. К микротомам с механической подачей относятся ультрамикротомы Портера — Блюма и Хаксли.
На всех этих микротомах ножи неподвижно закреплены, а объект, опускаясь вниз, режется иа тонкие срезы только в момент соприкосновения его с режущей кромкой ножа (рис. 32). При обратном движении объекта вверх из-за того, что после изготовления одиночного среза зазор между ножом и образцом очень мал, возможен «обратный захват» среза. Чтобы избежать захвата срезов при обратном движении образца, в ряде микротомов осуществлено движение образца по кругу (микротом Шестранда, УМТ-2) нли по параллелограмму (микротом
IOT
Портера — Блюма, Хаксли). В ряде ультрамикротомов расхождение ножа и образца при его обратном ходе осуществляется за счет магнитострикционного сжатия стержня, несущего образец (ультрамикротом Хаанстра [80], УМД-5), или за счет отвода держателя ножа назад при помощи электромагнита (Ультра-том-4800).
Все типы ультрамикротомов очень чувствительны к механическим сотрясениям и к колебаниям температуры. Оба фактора могут влиять на качество изготовления ультратонких срезов.
Ультратонкие срезы, если их собирать на поверхности самого ножа, сминаются, ломаются и прилипают к стеклу. Чтобы избежать этого, на верхнюю часть ножа помещают ванночку или корытце, заполненное жидкостью, на поверхность которой и попадают изготовленные срезы. Отсюда их легко выловить и перенести на специальные сетки (см. выше).
В ряде случаев, когда собственной «окраски» клеточных структур четырехокисью осмия недостаточно, можно проводить дополнительное контрастирование срезов при помощи водных растворов солей тяжелых металлов. Некоторые из таких солей откладываются на любых клеточных структурах, в то время как другие соли взаимодействуют лишь с определенными клеточными компонентами. Так, уранилацетат контрастирует все структуры, но более быстро и прочно связывается с гранулами рибонуклеопротеидов и с волокнами соединительной ткани [81]. Хорошо контрастирует мембранные структуры клетки фоофор-номолибденовая кислота, но особенно четко она окрашивает гликоген [81]. Широкое распространение при контрастировании получили соли свинца (ацетат свинца, гидроокись и моноокись свинца) [82]. Они хорошо контрастируют любые структуры, особенно мембранные. Контрастирование можно проводить не только на срезах, но и на кусочках тканей до их помещения в пластмассы.
г. Специальные приемы обработки тканей и срезов
Метод исследования ультратонких срезов в электронном микроскопе можно успешно сочетать с рядом специальных методов, таких, как, например, гистохимия, радиоаутография, иммунохимия.
Применяя гистохимические реакции при исследовании тканей в электронном микроскопе, необходимо соблюдать следующие требования. Конечные продукты реакции должны откладываться в местах локализации того или иного химического компонента клетки и не менять своего положения при дальнейшей обработке объекта. Качество и количество конечного продукта должны давать возможность определять места его локализации в клетках или тканях,
108
Кроме этих двух основных требований, добавляется условие, что проведение гистохимических реакций не должно приводить к образованию артефактов. Это последнее определяет крайне медленное внедрение гистохимических методов в электронную микроскопию. Имеющиеся на сегодняшний день подобные методы и реакции, относящиеся в основном к реакциям выявления мест активности некоторых ферментов,- еще далеки от совершенства. Для выявления мест локализации ферментов в клеточных структурах ткани необходимо фиксировать таким образом, чтобы не разрушить их ферментов. Лучшими фиксаторами в этом отношении являются формалин и другие альдегиды [66]. Фиксированные, а затем отмытые кусочки ткани переносятся в инкубационные среды, где ферменты реагируют с субстратами, и на месте их активности откладываются или тяжелые металлы (теллур, свинец), или гистохимические реагенты (соли тетразо-лия). Такими способами можно исследовать локализацию различных дегидрогеназ [83], фосфатаз [84], ацетилхолинэстеразы [85] и др. После проведения инкубации ткани необходимо снова подвергнуть фиксации, но уже в осмиевых растворах, чтобы повысить контрастность. Такие ткани затем заключаются в пластмассы и из них приготовляются срезы. Инкубирование тканей в средах, содержащих субстраты, обычно приводит к изменению внутриклеточных структур, хотя в ряде случаев достигнуты отчетливые гистохимические іреакции при хорошей сохранности структур [66].
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама