Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 50

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 44 45 46 47 48 49 < 50 > 51 52 53 54 55 56 .. 126 >> Следующая

I I " I
Ri R2 R3
То, что амидные группы связаны между собой не непосредственно, а через а-углерод, позволяет считать, что между ними нет существенного обмена электронами и взаимодействие имеет в основном диполь-диполь-ный характер. В случае полипептидов и белков речь может идти вообще только об изменении поглощения при переходе клубок — спираль, так как при гидролизе рвется пептидная связь, обусловливающая поглощение. Пептидная связь (см. рис. 3, в) является плоской, так как
n г п - я-орбиты делокализованы по
Рис. 5. Спектры поглощения спиральной м ..т „
U) и клубкообразной (2) поли-Ь-глута- трем атомам (JN, U) И миновой кислоты [6] связь N—С носит частично
двойной характер. В амид-ной группе имеются три я-орбиты, две из которых заняты в основном состоянии, и одна — /г-орбита — локализована на кислороде (см. рис. 3, в).
190 200 2/0 220 Длина Полны, ммк
В других опытах наблюдалось увеличение интенсивности этой полосы.
128
я->-я*-переходы поляризованы в плоскости группы, а п-*я*-переход запрещен. Однако он, по-видимому, проявляется у полипептидов в окрестности 225 ммк.
В 1959 г. Имахори и Танака обнаружили у полипептидов гипохромный эффект в окрестности 190 ммк, который подробно был исследован Розенхеком и Доти [6]. Спектры поглощения клубкообразной (верхняя кривая) и спиральной поли-/--глута-миновой кислоты изображены на рис. 5. Видно, что гипохромный эффект весьма велик. Как и в случае полинуклеотидов, можно предполагать, что этот гипохромный эффект обусловлен взаимодействием длинноволновой я->-я*-полосы с более коротковолновой я->-я*-полосой.
е. Спектрофотометрия как метод исследования биополимеров
Спектрофотометрия широко используется при исследовании биополимеров. Здесь будут кратко рассмотрены лишь некоторые ее применения.
Определение концентрации нуклеиновых кислот. Поскольку оптическая плотность D пропорциональна концентрации поглощающих молекул в растворе, ее измерение часто используется для определения концентрации поглощающих свет молекул. Так как поглощение нуклеиновой кислоты зависит от состояния, в котором она находится (спиральном, клубкообразном или в частично спирализованном), то для определения концентрации ее необходимо предварительно привести к стандартным условиям. Измеряя затем поглощение раствора, можно определить концентрацию нуклеиновых кислот [7].
Концентрацию белков и полипептидов определяют по спектрам связывающихся с ними красителей [8].
Определение степени спиральности и исследование перехода спираль — клубок в полину к-леотидах. Величина гипохромного эффекта пропорциональна количеству нуклеотидов, находящихся в спиральных участках молекулы. Поэтому для нахождения зависимости степени спиральности от какого-нибудь параметра (температуры, pH среды и т. д.) достаточно измерить зависимость от этого параметра величины гипохромного эффекта при какой-либо длине волны: удобнее всего проводить измерения при 260 ммк, так как при этой длине волны гипохромный эффект максимален. Обычно по оси ординат откладывают просто оптическую плотность D. Кривая зависимости оптической плотности от температуры -(рис. 6) называется кривой плавления, или кривой тепловой денатурации. Температура, при которой гипохромный эффект равен половине своего максимального значения, называется температурой плавления Тт полинуклеотида. Кроме того, кривые плавления биополимеров имеют конечную ширину ДГ.
9 Физические методы исследования белков
129
Температура плавления нуклеиновых кислот определяется средней энергией связи, приходящейся на пару оснований. Поскольку разные пары А—T (или А—У в случае РНК) и Г—Ц имеют различные энергии связи, температура плавления зависит от нуклеотидного состава. Температура плавления ДНК линейно растет с увеличением отношения Г+Ц/А + Г + Ц + Т. Следует отметить, что температура (и ширина интервала) плавления ДНК не зависит от молекулярного веса полимера.
Кривая плавления весьма чувствительна к наличию в растворе веществ, способных связываться с ДНК, например ионов во-
I
і T
Рис. 6. Зависимость величины оптической плотности от температуры для ДНК фага Т2 в 10~3 M цитрат-ном буфере (низкая иониая сила)
дорода (т. е. pH среды), ионов металлов, молекул красителей, (акридин оранжевый, профлавин и др.), некоторых антибиотиков (актиномицин), свободных нуклеотидов, РНКазы и т. д. (см. обзор [9]). Эти вещества меняют как температуру, так, в ряде случаев, и ширину интервала плавления.
При охлаждении образцов после нагревания величина гипо-хромного эффекта в той или иной степени восстанавливается. При нагревании до температуры, меньшей температуры конца плавления, при последующем охлаждении происходит практически полное восстановление. Если образцы нагревать выше температуры конца плавления, то гипохромный эффект восстанавливается не полностью при охлаждении ДНК, но практически всегда восстанавливается при охлаждении РНК.
Ренатурацией называется восстановление комплементарной спиральной структуры нуклеиновой кислоты при снятии действия
Предыдущая << 1 .. 44 45 46 47 48 49 < 50 > 51 52 53 54 55 56 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама