Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 79

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 73 74 75 76 77 78 < 79 > 80 81 82 83 84 85 .. 126 >> Следующая

Рис. 34. Спектры флуоресценции комплексов акридинового оранжевого с нативной (А) и денатурированной (Б) ДНК
СдО= 5- 10-' Af; сднК =0> 5, 10, 20, 40, мкг/мл для кривых /, 2, 3, 4 соответственно. Кривые 4' и 4" — разложение спектра комплексов с денатурированной ДНК на мономерную и димериую составляющие [80]
и димеров, связанных с ДНК, существенно различается по всем своим основным характеристикам, которые отличны и от характеристик люминесценции свободных молекул в растворе.
Спектр люминесценции комплексов АО с нативной ДНК отличается от спектра люминесценции свободных молекул в водном (солевом) растворе лишь некоторым сужением полосы, обусловленным более крутым спаданием интенсивности в длинноволновой части спектра. Максимум спектральной полосы в обоих случаях лежит в зеленой части спектра — около 530 ммк (рис. 34, Л). Спектр флуоресценции связанных с ДНК димеров этого красителя сильно смещен в-красную сторону: максимум его лежит около 640 ммк (см. рис. 54, Б). Квантовый выход й длительность флуоресценции связанных мономеров примерно в 2,5 раза больше, чем для свободных мономеров в растворе: для свободных мономеров р=0,35, т=2* 10~9 сек, для связанных мономе-
199
ров p =G,9, т = 5 • 10-9 сек (флуоресценция димеров в растворе пренебрежимо слаба).
Когда мы наблюдаем флуоресценцию через зеленый светофильтр, пропускающий практически только излучение мономерных молекул АО (свободных и связанных), то вклад в наблюдаемое свечение будут давать молекулы двух различных сортов, каждый из которых характеризуется своим значением величин и т. При наблюдении через красный светофильтр основной вклад в люминесценцию дают связанные димеры, но в большей или меньшей степени будут давать вклад и мономеры. Таким образом, в этом случае мы имеем дело со смесью люминесцирующих образований трех различных типов. Во всех этих случаях понятие о средней длительности флуоресценции или средней длительности жизни возбужденных молекул теряет определенность и ясный физический смысл. Однако измеряемый на флуорометре сдвиг фазы ф между первичным модулированным потоком возбуждающего излучения и вторичным потоком люминесценции или величина
7= !SJE1
(61)
Рис. 35. Зависимость значений т для зеленой и красной области спектра, T3 (1) и тк (2—4) от содержания денатурированной ДНК в смеси с нативной
Общая концентрация ДНК 12 мкг/мл. Кривые 2, 3, 4 сняты со светофильтрами КС-10, КС-13 и КС-17 соответственно
которую можно назвать «флуоромет-рическим т», представляет собой очень чувствительный индикатор на соотношение молекул различных типов в изучаемом объекте. Поскольку димеризация происходит, как было сказано, только на однотяжевых структурах, то эта величина является чувствительным индикатором на соотношение двухтяжевых и однотяжевых участков в исследуемой
нуклеиновой кислоте [81].
О чувствительности этого индикатора дает представление рис. 35, изображающий в графической форме зависимость относительных значений изменения величины ткр (индексом «кр» отмечаются значения величины т, измеренные при наблюдениях через красный светофильтр) от процентного содержания денатурированной ДНК в смесях с нативной. Как видно из рис. 35, в благоприятных условиях этот метод позволяет обнаружить примесь денатурированной ДНК в количестве 1—3%.
Этот метод был применен прежде всего для определения сте-
200
пени спиральности транспортной (низкомолекулярной) РНК (тРНК), т. е. доли ее оснований, входящих в Уотсон-Криковские комплементарные пары и ответственных за образование спирали-зованных участков [82]. На рис. 36 показана зависимость величины ткр от концентрации тРНК в растворе для нативной ДНК (кривая 1), для денатурированной ДНК (кривая 3) и для тРНК (кривая 2). Интерполяция дает для последней степень спирали-зации около 0,8, что хорошо совпадает с рядом прежних данных, полученных другими методами.
Тем же методом удалось показать, что при инкубации тРНК с рибонуклеазой поджелудочной железы атака ри-бонуклеазы, по крайней мере в наших условиях (при избытке ионов Mg), направлена в первую очередь на однотяжевые участки и не затрагивает двух-тяжевых [83]. В сочетании с поляризационными измерениями, о которых будет сказано і|иже, этот факт дал возможность однозначного установления вторичной структуры тРНК.
Этот метод был также применен для изучения изменений структуры ДНК фагов при УФ-облучении [84, 85]. Существенно то, что высокая чувствительность метода позволила провести детальное изучение этих изменений (образование денатурированных участков и тими-диновых «сшивок») при очень
малых дозах облучения, близких к биологическим. Это дало возможность установить известные корреляции между этими изменениями структуры ДНК и биологическими последствиями облучения.
40 50
Рис. 36. Зависимость ткр от концентрации нуклеиновой кислоты
ж. Поляризация флуоресценции растворов сложных органических молекул
Причины частичной поляризации флуоресценции. Тот факт, что излучение флуоресценции растворов сложных органических молекул (красителей) является всегда в большей или меньшей мере частично поляризованным, был впер-
Предыдущая << 1 .. 73 74 75 76 77 78 < 79 > 80 81 82 83 84 85 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама