Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 83

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 77 78 79 80 81 82 < 83 > 84 85 86 87 88 89 .. 126 >> Следующая

±_±= (JL_!Ui +JSLA (67)
P з V Po з)\ Vi\ ) из которой следует, что величина — должна линейно зависеть от
отношения абсолютной температуры раствора к его вязкости ^-J-
Рис. 40 показывает, насколько хорошо оправдывается этот вывод в эксперименте.
208
1 T
Из наклона прямой на графиках, дающих зависимость — от —,
P ч
можно вычислить объем частицы, если ее можно считать сферической. Определения такого рода для молекул красителей хорошо совпали с другими данными.
При изучении макромолекул биополимеров уже нельзя всегда считать, что частица имеет сферическую форму. Напротив, во многих случаях мы имеем дело с частицами, резко асимметричными, палочкообразными. Апроксимируя такие частицы в виде эллипсоидов, Вебер [89] построил для них теорию вращательной деполяризации и показал, что с известным приближением формула (65) сохраняет силу и в этом случае, но время релаксации 0, которое мы будем обозначать через 0ЭЛ, представляет собой среднее гармоническое из трех главных времен релаксации, соответствующих вращению молекулы вокруг трех осей эллипсоида.
В частности, для эллипсоидов вращения
2 (68)
І/Єі + 1/Єз
5? 7,040° Т/1
Рис. 40. Зависимость \/Р от Т/ц для раствора флуорес-цеина в глицерине
Так как величины O1 и S2 пропорциональны отношению ц/Т, то и
1
в этом случае должна сохраняться линейная зависимость между —
P
T
и — , что также подтверждено экспериментом [89]. ч
Из формул Вебера можно вычислить для заданного отношения осей эллипсоида вращения (а/Ь) отношение времени релаксации 6ЭЛ к тому значению этой величины Q0, которое имела бы сферическая частица того же объема при данных условиях. Такая теоретически
рассчитанная зависимость отношения — от — показана на рис.41.
е0 ь
Пользуясь этой кривой или рассчитанными, по Веберу, кривыми
зависимости отношения —--— от — для разных значении ab,
1/Po-V3 O0
можно, как будет^показано ниже, оценивать асимметрию макромолекул и устанавливать форму частиц биополимеров.
Примеры применения поляризационных измерений к проблемам молекулярной биологии. Из сказанного выше следует, что резких изменений в степени поляризации флуоресценции можно ожидать (при постоянстве т)
J4 Физические методы исследования белков 209
тогда, когда существенно меняется либо объем молекулы, либо степень ее асимметрии. Первый случай имеет место при распаде макромолекулы на более мелкие части (субъединицы) или при образовании комплекса флуоресцирующей молекулы с другой молекулой.
В качестве примера можно указать на работу [96], в которой изучался распад молекулы фермента аспартатглутаматтрансами-назы (КФ :6.2.1.1) на две субъединицы при разбавлении водного раствора этого фермента. Резкое падение степени поляриза-. ции флуоресценции как самого фермен-
в'в« та (точнее, его кофермента), так и
связанного с ферментом ковалентными связями красителя (изотиоцианата флуоресцеина) показывает, что при определенном разведении фермент
2,5 2,0
1,5 1,0
14 8 12 16 20 действительно распадается на две "Iі субъединицы (рис. 42, кривые 1, 2). Рис. 41. Теоретическая за- В случае рибонуклеази (кривая 3) та-висимость отношения е/6о от кое падение поляризации отсутствует,
что вполне естественно, так как рибонуклеаза — одноцепочечный, сравнительно низкомолекулярный белок. Интересно отметить, что каталитическая активность (сродство к субстрату) оказалось у субъединиц фермента значительно выше, чем у агрегированной (димерной) формы. Это позволяет думать, что, возможно, распад на субъединицы и агрегирование фермента есть один из механизмов регуляции его активности в клетке.
Пример возрастания поляризации флуоресценции при ком-плексообразовании можно найти в работе [97]. При добавлении к раствору красителя акридинового оранжевого возрастающих количеств аденина или аденозинтрифосфата поляризация флуоресценции красителя резко возрастает. Напротив, при добавлении пиримидиновых оснований или нуклеотидов такое возрастание поляризации флуоресценции не имеет места (рис. 43). Это свидетельствует о том, что данный краситель комплексируется с пуриновими основаниями и не комплексируется с пиримидиновыми.
Тем же методом Массей, Харрингтон и Хартли [98] исследовали ферменты — химотрипсин и химотрипсиноген, обнаружив полимеризацию этих ферментов при увеличении концентрации, и определили число мономеров в полимере. Оказалось, что это число равно 4—8 для химотрипсина и 2 для химотрипсиногена, причем в последнем случае субъединицы соединяются «встык», образуя цепочку. В работе [99] изучение поляризации флуоресценции позволило выяснить влияние pH среды на взаимодействие акридинового оранжевого с ДНК.
Последовательное применение развитой Вебером теории вращательной деполяризации для молекул, которые можно апрокси-
210
мировать в виде эллипсоидов, позволяет решать не только та кие относительно простые задачи, но и более сложные, связанные с.определением формы макромолекул. Так, Вебер [89] показал, что молекулы овальбумина имеют форму, близкую к сферической, тогда как молекулы сывороточного альбумина представляют собой эллипсоиды с отношением осей 4:1.
Предыдущая << 1 .. 77 78 79 80 81 82 < 83 > 84 85 86 87 88 89 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама