Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 9

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 126 >> Следующая

ПОЛЯ.
Существуют различные способы получения неискаженного изображения обратной решетки кристалла [33—35]. Основная идея всех этих методов сводится к следующему. Если заставить кристалл и пленку синхронно двигаться так, что во время съемки расстояние между кристаллом и пленкой не будет меняться и плоскость пленки все время будет оставаться параллельной плоскости обратной решетки кристалла, можно сохранить принцип подобия, и на пленке получится неискаженное изображение расположения узлов в этой плоскости. Так как кроме отражений, соответствующих узлам снимаемой плоскости обратной решетки, на пленку могут попасть отражения, соответствующие узлам других плоскостей, используются специальные экраны, вырезающие лучи, соответствующие только выбранной плоскости.
Разные методы фотографирования обратной решетки отличаются один от другого характером движения кристалла.
Для кристаллов белков наиболее приемлем прецессионный метод Бургера [34—35], дающий для белков по сравнению с другими методами существенное сокращение экспозиций. Суть его состоит в следующем. Нормаль к снимаемой плоскости обратной решетки совершает прецессионные движения вокруг направления первичного луча с определенным углом прецессии \л. Точно такие же движения совершает нормаль к плоскости пленки, с тем же углом прецессии. Такое движение позволяет получить неискаженное изображение круговой области обратной решетки (рис. 9); радиус этой области легко меняется изменением угла прецессии.
Последнее обстоятельство особенно существенно. Кристаллы белков и вирусов долго облучать нельзя (не более 40—50 час. на трубке средней мощности), так как они разрушаются. В то же
28
время в прецессионном методе Бургера экспозиций резко уменьшаются при уменьшении размеров снимаемой области. Уменьшая размер снимаемой области белка до граничных значений d~2 А, мы ничего не теряем, так как интенсивности рефлексов для белков и вирусов с d<2 А, как правило, очень малы и измерять их фотометодом нет смысла. Это позволяет получить хорошие рентгенограммы белка за 20—30 час. при съемке на наших стандартных установках типа УРС-60, если кристаллы имеют достаточные размеры.
Рис. 9. Схема прецессионного метода Бургера.
/ — нулевая плоскость; 2 — n-я плоскость; Л — положение, пленки при съемке нулевой плоскости; 4 — то же, при съемке; п-й плоскости
Так как кристаллы белков и вирусов стабильны лишь во влажном состоянии, все исследования ведутся на кристаллах, помещенных в запаянные стеклянные капилляры, на дне которых находится капля маточного раствора и, таким образом, сохраняется необходимая влажность. Стенки капилляра делаются очень тонкими и практически никакого паразитного рассеяния рентгеновских лучей не дают. Снимают белки обычно на СиКа-из-лучении с длиной волны 1=1,54 А.
В настоящее время для измерения интенсивностей отраженных кристаллом рентгеновских лучей применяются автоматические ионизационные приборы — дифрактометры. Тем не менее прецессионные рентгеновские камеры продолжают широко использоваться в белковых рентгеноструктурных лабораториях^ На этих камерах сравнительно просто могут быть получены данные, необходимые для определения третичной структуры некотог
29?
рых белков. Так, данные для третичной структуры миоглобина, восстановленного и окисленного гемоглобинов были получены именно на таких камерах.
Кроме того, вся предварительная работа по отбору кристаллов и их производных для последующей работы проводится только на этих камерах.
ж. Дифрактометры
Регистрация рентгеновской дифракционной картины может быть осуществлена также ионизационными методами. Для этого служат специальные приборы, называемые дифрактометрами.
Дифрактометры позволяют измерять положения и интенсивности рентгеновских отражений при помощи гейгеровских, пропорциональных или сцинтилляционных счетчиков, которые, двигаясь синхронно вместе с кристаллом, регистрируют последовательно дифракционные максимумы.
Регистрация интенсивностей при помощи счетчиков имеет много преимуществ по сравнению с фотографическим методом. Во-первых, при использовании автоматических дифрактометров значительно сокращается время, требуемое для измерения интенсивностей рефлексов полного дифракционного поля, что весьма существенно для соединений с большими параметрами ячеек, таких, например, как белки. На первых стадиях исследования гемоглобина определение фотометодом более чем 7000 значений интенсивностей рефлексов потребовало нескольких лет работы. В настоящее время эти данные могли быть получены при помощи дифрактометра менее чем за месяц. Во-вторых, точность измерений, определяемая длительностью регистрации максимумов, может быть доведена до 1—2% (фотометод дает 10—15%). Дифрактометры необходимы для измерения слабых рефлексов дальних участков дифракционного поля, которые не могут быть выявлены фотометодом при больших экспозициях, так как время жизни белковых кристаллов ограничено. Результаты измерений на дифрактометре могут быть автоматически записаны на перфокарты или перфоленту, которые затем непосредственно используются в вычислительных машинах. Ионизационные методы позволяют получить значения интенсивностей всех отражений в единой шкале, которая затем может быть сведена к абсолютным единицам измерения. При использовании фотографических методов перевод интенсивностей в единую шкалу измерений связан с определением поправочного коэффициента для каждого из снимков, что приводит к дополнительным погрешностям.
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама