Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 94

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 88 89 90 91 92 93 < 94 > 95 96 97 98 99 100 .. 126 >> Следующая

g = Q МОЖеТ ПрИВеСТИ К НеверНОЙ ОЦеНКе ВеЛИЧИНЫ (т)уд)й = 0 и,
соответственно,— к неправильному представлению о структуре ДНК в растворе. Кривая, приведенная на рис. 9, убедительно доказывает, что только при g, меньших 1,0 се/с-1, молекулы ДНК в растворе можно считать практически недеформирован-
ными, а величину — — не зависящей от градиента скорости с
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 д
Рис. 9. Зависимость удельной
вязкости раствора нативной
ДНК от градиента скорости потока
потока.
КлубкоО'бразная молекула нативной ДНК, как об этом свидетельствуют данные по светорассеянию, обладает большими размерами, чем обычный гауссов клубок, образованный гибкой полимерной цепью той же длины. Это является следствием относительной жесткости двойной молекулярной цепи ДНК, не допускающей крутых и частых изгибов. Вместе с тем достаточно длинные отрезки двухнитевой спиральной цепи ДНК обладают гибкостью, что позволяет молекуле ДНК приобрести клуб-кообразную форму. Такие цепные молекулы называются полужесткими. Показатель а в уравнении характеристической вязкости для таких молекул должен иметь промежуточное значе-
236
ниє между а = 0,5 (гибкие цепные молекулы) и а= 1,8 (жесткие палочкообразные молекулы).
Как отмечено Эйгнером и Доти [8], показатель а для ДНК с различными молекулярными весами (от 0,3-106 до 130-106) действительно изменяется в этих пределах (рис. 10). При малых значениях M (0,3•1O6—2•1O6) форма молекул ДНК близка к
500
200 100 50
20 10
_і_і_' і і і і і
_і—і і і і 11
_і_і_і і і і 11
0,5
10 20
50 /00 M
Рис. 10. Зависимость характеристической вязкости нативной ДНК от молекулярного веса ДНК
палочкообразной (а= 1,32; /?=1,05-10"-7). Напротив, при достаточно больших M (от 2•1O6) молекулы ДНК приближаются по форме к гауссовым клубкам (а = 0,7; /?=6,9- Ю-5). Для ДНК в промежуточной области (УИ = 0,5 ¦ 106-нЗ • 106) можно пользоваться" приближенной формулой, предложенной ранее Доти (а=1,12; /?=1,45-10-6 дл/г [24]) К
При денатурации ДНК, когда разрушается ее вторичная структура и происходит разъединение полинуклеотидных цепей,
1 Все указанные зависимости справедливы для ДНК в стандартном солевом растворе, содержащем 0,15 M NaCl, 0,015 M цитрата Na, pH 7,0.
237
составляющих двойную спираль ДНК, характеристическая вязкость претерпевает существенное изменение, зависящее от молекулярного веса ДНК и от ионной силы. Так, для денатурированной ДНК Escherichia coli в стандартном солевом растворе в уравнении для характеристической вязкости коэффициент К (4,9 • 10~4) и показатель а (0,55) значительно отличаются от таковых для нативной ДНК в том же диапазоне молекулярных весов (1,45- 10~6 и 1,12, соответственно (18, 24]). Следовательно, однонитевая полимерная цепь денатурированной ДНК не обладает той жесткостью, которая свойственна нативной структуре, и молекула ДНК после денатурации приобретает свойства гауссова клубка с гибкой полимерной цепью. Однако, при уменьшении ионной силы полинуклеотидная цепь денатурированной ДНК вновь приобретает некоторую жесткость за счет электростатического отталкивания отрицательно заряженных фосфатных групп, которое при большой ионной силе экранируется про-тивоионами. Об этом свидетельствует, например, увеличение показателя в уравнении характеристической вязкости денатурированной ДНК от а = 0,55 (см. выше) ДО' а = 0,91 при уменьшении ионной силы примерно в 15 раз (8].
Этот последний пример показывает, что при изучении растворов нуклеиновых кислот нельзя не учитывать, что эти биополимеры являются полиэлектролитами (то же относится и к белкам) . Вследствие наличия большого количества заряженных групп в молекулах белков и особенно нуклеиновых кислот необходимо при всех измерениях сохранять одинаковыми ионные условия, точнее, ионную силу раствора. Только в этом случае можно быть уверенным, что конфигурация молекул при измерениях остается неизменной. В серии измерений с уменьшающимися концентрациями полиэлектролита для определения [ц\ недостаточно сохранять постоянным содержание солей в растворе, так как уменьшение концентрации полиэлектролита ведет к понижению ионной силы — той ее доли, которая создается заряженными группами. Эффективная ионная сила в данном случае остается постоянной при так называемом изоионном разбавлении [25], когда, уменьшая концентрацию полиэлектролита, одновременно увеличивают на некоторую рассчитанную величину концентрацию солей.
2. Метод ультрацентрифугирования
Одним из самых !распространенных и плодотворных методов изучения природных и синтетических полимеров является метод ультрацентрифугирования. Он заключается в ісоздамии больших центробежных ускорений, превышающих ускорение земного притяжения в 104—105 раз в роторах, вращающихся со скоростями
238
до 60 000 об/мин. Под действием таких сильных центробежных полей происходит осаждение (седиментация) молекул растворенного полимера, аналогично осаждению крупных частиц суспензии под действием поля тяготения Земли. При низких ускорениях осаждение частиц молекулярных размеров невозможно ¦вследствие хаотического теплового движения, влияние которого тем больше, чем 'меньше размер частиц.
Предыдущая << 1 .. 88 89 90 91 92 93 < 94 > 95 96 97 98 99 100 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама