Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Биохимия -> Лазуркин Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 98

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркин Ю.С.

Лазуркин Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — М.: Наука, 1967. — 342 c.
Скачать (прямая ссылка): afizsvoystvapentanola1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 92 93 94 95 96 97 < 98 > 99 100 101 102 103 104 .. 126 >> Следующая

рле. 18. Схема интерферометра по Релею, применяемая в ультрацентрифуге Spinco E
243
та от источника (/), которые формируются коллимирующей линзой (2), параллельными щелями (3) и (5) ,кюветы (4) и двумя неподвижными апертурными щелями (6). Параллельные пучки поворачиваются зеркалом (8) и сводятся линзой (7) в плоскости шлирен-диафрагмы (9), образуя 'Систему интерференционных полос. Эта система увеличивается объективом (10) и цилиндрической линзой (11), так что на снимке (12) получается ряд полос одинаковой интенсивности. Полосы параллельны оси
Л
PacmOoo Граница РастОоритель
Рис. 19. Схематическое изображение интерференционной картины
седиментирующей границы
1—18 — номера полос
цилиндрической линзы при отсутствии градиента показателя преломления раствора в кювете и искривлены в областях, где градиент отличен от нуля. Смещение полосы относительно линии, для которой — = 0(базовая линия), характеризует изме-
нение показателя преломления раствора. Приращение показателя преломления на расстоянии х от оси вращения ротора определяется по числу полос, пересеченных продолжением базовой линии до точки X (рис. 19), и равно
Ап(х)= NX
к 1
где X — длина волны 'монохроматического света (в см); h — путь луча в кювете (в см) \ N — число полос, пересеченных продолжением базовой линии до точки х.
Число полос в лучшем случае может быть отсчитано с точностью до 0,04 полосы, что дает более высокую точность определения концентрации, чем метод Филыюта — Свенссона. Среди других интерференционных схем заслуживает внимания примененный Цветковым [5] поляризационный интерферометр, значительно повышающий чувствительность метода.
Абсорбционный метод. Для коэффициентов седиментации биополимеров, особенно нуклеиновых кислот, характерна сильная !концентрационная зависимость, что вызывает необходимость проведения исследований при предельно низких концент-
249
Рис. 20. Седиментационная диаграмма, полученная с применением абсорбционной оптики в ультрафиолетовом свете для раствора ?-лаіктоглобулина а — фотография седиментирующей границы; б— результат фотометрирова-кия снимка [271
Цифры 0—5 относятся к снимку и седиыентогранме, полученным в разные последовательные моменты седиментации.
рациях. Такое же требование возникает при работе с препаратами, недоступными в больших количествах. В этом случае применяется абсорбционный метод, в котором для измерения концентраций используется поглощение (абсорбция) света исследуемыми веществами в той или иной области спектра. Большинство веществ биологического происхождения обладает полосами поглощения в близкой ультрафиолетовой области. Поэтому ультрацентрифуги с абсорбционной регистрацией оборудуются кварцевой оптикой и источником ультрафиолетового излучения, которым является ртутная лампа низкого давления. Хлор бромный светофильтр, помещенный перед лампой, отсекает видимую часть спектра лампы и пропускает линии излучения лампы (248, 254 и 265 ммк). Абсорбционная оптика выделяется в отдельный канал и состоит из коллимнрующей и конден-сорной линз и фотоаппарата. Поскольку оптическая плотность растворенного вещества прямо пропорциональна его концентрации, метод абсорбцив является самым прямым способом наблю-
250
дения за перераспределением вещества >и движением границ в кювете при центрифугировании. Растворитель выбирают не-поглощающим. Тогда на снимке области раствора и растворителя отличаются различной степенью потемнения негатива {рис. 20, а). При этом возможное перераспределение непоглоща-ющих компонент растворителя на фотоснимках Никак не отражается.
При выборе концентрации исследуемого вещества и времени экспозиции необходимо, чтобы степень потемнения негатива была пропорциональна концентрации вещества. Тогда для ее определения достаточно произвести фотометрирование снимка (см. рис. 20, б). Абсорбционный метод позволяет работать с минимальным количеством нуклеиновых кислот — до 0,01 мг/мл, в то время как методы, описанные выше, требуют для измерений не менее 0,5—1 мг/мл. Точность определения концентрации этим методом относительно невелика. Это связано с многочисленными погрешностями фотографического процесса, а также с нестабильностью работы ртутной лампы,
В последнее щремя выпускаются приставки для прямой записи кривых поглощения на самопишущем приборе при помощи фотоумножителя, что значительно облегчает процесс обработки данных [32]. Возможно также применение монохроматора, что позволяет проводить эксперименты шрн различных длинах волн [33]. Это расширяет область применения метода, позволяя работать с веществами, поглощающими в других областях спектра, а также наблюдать за ходом седиментации отдельных компонент сложных растворов.
б. Метод скорости седиментации
Метод скорости седиментации и его разновидности широко применяются как для исследования свойств 'макромолекул в растворе, так и для разделения веществ. Основной измеряемой величиной в этом методе является коэффициент седиментации, который зависит от формы макромолекулы в данном растворе и от молекулярного веса.
Движение макромолекулы в центробежном поле происходит под действием ряда сил. На нее действует/ с одной стороны, центробежная сила Vpm®>2xi где V---объем молекулы; рм— ее плотность; а — угловая скорость ротора1; х— расстояние до осн вращения. С другой стороны, на иее действует архимедова сила выталкивания из раствора, которая равна Vpp(u2x, где рр — плотность растворителя. Таким образом, результирующая этих двух сил равна V(Pm—РР)<й2х.
Предыдущая << 1 .. 92 93 94 95 96 97 < 98 > 99 100 101 102 103 104 .. 126 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама