Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Фармацевтика -> Грачева И.М. -> "Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов " -> 13

Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов - Грачева И.М.

Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С., Борисенко Е.Г. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. — 240 c.
Скачать (прямая ссылка): labpraktikumpotehfermentpreparatov1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 69 >> Следующая

при 30°С. Выдержка в термостате необходима для наиболее полного извлечения ферментов из культуры продуцента. После настаивания смесь отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр и фильтрат используют как исходный раствор при определении ферментативных активностей.
Ферментативные активности в культуральной жидкости, диффузионной вытяжке или жидком концентрате определяют непосредственно в данных растворах или производя необходимые разведения с учетом особенностей методов определения активностей.
При определении ферментативных активностей очищенных препаратов, полученных осаждением органическими растворителями, высаливанием или высушиванием на распылительной сушилке, в качестве исходного раствора используют 0,1%-ные растворы препаратов.
Наилучшее растворение препаратов достигается при растирании их в фарфоровой ступке с небольшим количеством толченого стекла и 10—15 см3 забуференной воды. После растирания смесь переносят количественно в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки забуференной водой. При наличии нерастворенного осадка его отфильтровывают через складчатый фильтр; прозрачный фильтрат служит исходным раствором для определения ферментативной активности.
Раствор ферментных препаратов может храниться в течение одних суток при температуре от +2 до —4°С.
Определение протеолитической активности (ПС)
МЕТОД АНСОНА В МОДИФИКАЦИИ
Метод основан на гидролизе белка казеината натрия препаратом фермента, находящимся в исследуемом растворе, с последующей инактивацией фермента и осаждением негидролизованного белка трихлоруксусной кислотой (ТХУ).
Протеолитическая активность характеризует способность ферментов катализировать расщепление белка до пептидов и аминокислот и выражается числом единиц протеазы в 1 г препарата.
За единицу протеолитической активности (ПС) принимают такое количество фермента, которое за 1 мин
при 30°С превращает в неосаждаемое трихлоруксусной кислотой состояние казеинат натрия в количестве, соответствующем 1 мкмоль тирозина (1 мкмоль тирозина равен 0,181 мг).
Активность грибных и бактериальных протеиназ определяют при следующих значениях pH: 2,5±0,2 — кислая протеиназа; 3,5±0,2 — кислая протеиназа; 7,2± ±0,2 — нейтральная протеиназа; 9,5 ± 0,2 — щелочная протеиназа.
Необходимые реактивы. 0,1 М универсальный буферный раствор — готовится смешиванием равных объемов растворов А (0,1 М раствор уксусной кислоты—5,7 см3 ледяной уксусной кислоты растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды), В (0,1 М раствор ортофосфорной кислоты— 6,45 см3 ортофосфорной кислоты растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды) и С (0,1 М раствор орто-борной кислоты — 6,18 см3 ортоборной кислоты растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды) и различных количеств 1 н. раствора гидроксида натрия (40 г NaOH растворяют в 1 дм3 воды) —получают буферные растворы с pH от 1,8 до 12,0; 0,5 М универсальный буферный раствор — готовится смешиванием пятикратных количеств растворов А, В и С; 0,01 М универсальный буферный раствор—-готовится смешиванием девяти объемов дистиллированной воды с одним объемом 0,1 М универсального буферного раствора; 0,3М раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ) — 50 г трихлоруксусной кислоты разводят дистиллированной водой в мерной колбе на 1 дм3 и фильтруют; 1 н. раствор соляной кислоты — 82,2 см3 соляной кислоты разбавляют в 1 дм3 дистиллированной воды; 0,5 М раствор карбоната натрия — 53 г безводного карбоната натрия разводят дистиллированной водой в мерной колбе на 1 дм3; реактив Фолина (основной раствор) — 100 г вольфрамата натрия и 25 г молибдата натрия вносят в круглодонную колбу вместимостью 2 дм3 с пришлифованным обратным холодильником, добавляют 700 см3 дистиллированной воды, 50 см3 85%-ного раствора ортофосфорной кислоты плотностью 1,869 г/см3 и 100 см3 концентрированной соляной кислоты; смесь кипятят на слабом огне на асбестовой сетке в течение 10 ч, охлаждают, переносят в колбу Эрленмейера, стенки колбы и холодильник ополаскивают »50 см3 воды, затем туда же добавляют 150 г суль-
фата лития и 5 капель брома. Открытую колбу нагревают и кипятят содержимое под тягой на слабом огне 15—20 мин, чтобы удалить пары брома (раствор должен иметь желтую окраску. Если раствор зеленый, то обработку бромом повторяют). После охлаждения раствор доводят дистиллированной водой до 1 дм3 и фильтруют через трубку Аллина, заполненную стеклянной ватой. Концентрацию кислоты проверяют титрованием разбавленного в десять раз реактива Фолина ОД и. раствором NaOH по фенолфталеину. Приготовленный раствор хранят в склянке из темного стекла. Рабочий раствор Фолина готовят разведением основного раствора дистиллированной водой в два раза; 0,2 н. раствор соляной кислоты—16,45 см3 соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой до 1 дм3.
Приготовление растворов ферментных препаратов. 0,1—1,0 г исследуемого препарата отвешивают на аналитических весах, тщательно растирают в стаканчике стеклянной палочкой с небольшим количеством 0,1 М универсального буферного раствора с pH соответственно для кислых протеиназ 2,5± 0,2 и 5,5±0,2; для нейтральных— 7,2±0,2, для щелочных — 9,5±0,2. Затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 ом3 и доводят этим же универсальным буферным раствором объем жидкости до метки.
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 69 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама