Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Фармацевтика -> Грачева И.М. -> "Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов " -> 23

Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов - Грачева И.М.

Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С., Борисенко Е.Г. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. — 240 c.
Скачать (прямая ссылка): labpraktikumpotehfermentpreparatov1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 17 18 19 20 21 22 < 23 > 24 25 26 27 28 29 .. 69 >> Следующая

растворы приобретают следующую окраску: контроль-
ный—синюю, опытный — фиолетовую различной интенсивности в зависимости от количества непрогидролизо-ванного крахмала.
Непосредственно после смешивания растворов определяют их оптическую плотность на фотоэлектроколориметре, используя светофильтр с максимумом светопро-,пускания при Я = 656 нм, пользуясь кюветами с толщиной поглощающего свет слоя 1 см. Контрольным раствором при колориметрировании исследуемых растворов является дистиллированная вода.
Оптическая плотность контрольного раствора Di соответствует количеству исходного крахмала субстрата. Оптическая плотность опытного раствора \D2 соответствует количеству крахмала, оставшегося после действия фермента. Разница между показателями оптических плотностей растворов соответствует гидролизованному количеству крахмала субстрата.
Количество гидролизованного крахмала С (в г) определяют по формуле C = 0,l (Di—Dz) \Db где 0,1 —количество крахмала, взятое для испытания в качестве субстрата, г.
Если количество гидролизованного крахмала меньше 0,02 или больше 0,07 г, то испытание повторяют. Для этого при приготовлении рабочего раствора фермента берут большее или меньшее количество исходного раствора для разбавления.
Если в результате ферментативной реакции количество превращенного крахмала находится в указанных пределах, полученные данные используют для расчета амилолитиче'ской активности.
Амилолитическую активность АС (в ед./г) препаратов бактериального происхождения определяют по формуле АС= (5,885С +0,001671) 1000 : п, а амилолитическую активность АС! (в ед./г) препаратов грибного происхождения— по формуле ACi= (7.264С—0,03766) 100 : '¦п> где 5,885; 0,001671; 7,264; 0,03766 — коэффициенты Расчетного уравнения, полученные при математической °бработке экспериментальных данных зависимости количества гидролизованного крахмала от количества фермента, взятого для испытания. В коэффициенты введен множитель для пересчета на 1 ч действия фермента; С— оличество прогидролизованного крахмала, г; 100,
1600 — коэффициенты пересчета миллиграммов в гра.у. мы; п — количество ферментного препарата, взятое для испытания, мг.
КАПЕЛЬНЫЙ МЕТОД
(ПО КЛИМОВСКОМУ И РОДЗЕВИЧ)
Амилолитическая активность, обусловленная в основ, ном наличием в препарате а-амилазы, характеризует способность фермента катализировать гидролиз крахма-ла до неокрашиваемых йодом продуктов. При наличии в препарате а-амилазы и глюкоамилазы этим мето-дом определяется суммарное действие всех амилолити-ческих ферментов.
За единицу амилолитической активности в этом методе принято такое количество фермента, которое катализирует расщепление 1 г растворимого крахмала до продуктов, неокрашиваемых йодом, за 1 ч при температуре 30°С в строго определенных условиях. Амилоли-тическую активность АС выражают числом указанных единиц в 1 г препарата, культуры или 1 см3 раствора, АС показывает, сколько граммов крахмала может быть гидролизовано до неокрашиваемых йодом продуктов 1г препарата, культуры или 1 см3 раствора за 1 ч в условиях определения. Конец реакции контролируют визуально по йодной пробе.
Чувствительность метода определяют минимальным количеством времени, за которое можно визуально уловить изменение окраски йода. Допускают, что скорость ферментативной реакции прямо пропорциональна количеству примененного фермента и остается постоянной на протяжении от 5 мин до 1 ч, т. е. реакция подчиняется закону реакции нулевого порядка. Кроме того, установлено влияние величины pH и химической природы буфера на величину АС. С ацетатным буфером (pH 4,7) величина АС у грибных препаратов в среднем в 1,5 раза выше, чем при определении с фосфатным буфером (pH 6,0). Поэтому при определении АС грибных культур рекомендуется брать ацетатный буфер.
Недостатком метода является нечеткость визуального определения конца реакции.
Необходимые реактивы. Ацетатный буфер с pH 4J для ферментов грибного происхождения; фосфатный бу-
фер с pH 6,0 для ферментов бактериального происхождения; 1%-ный раствор крахмала (раствор крахмала, употребляемый для анализа грибных препаратов, должен иметь pH 4,7, для анализа бактериальных препаратов— 6,0); растворы йода — для приготовления основного раствора йода в тарированный стаканчик с притертой крышкой отвешивают 4,4 г йодида калия, 1,4 г металлического йода и добавляют около 2,0 см3 дистиллированной воды. Стаканчик закрывают крышкой, содержимое перемешивают и по растворении йода переводят раствор в мерную колбу на 100 см3 с притертой пробкой. Доводят объем дистиллированной водой до метки. Содержимое колбы хранят в темном прохладном месте. Основным раствором йода можно пользоваться в течение 30 дней со дня его приготовления. Рабочий раствор йода готовят из основного раствора; для этого 20 см3 основного раствора йода наливают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 4,4 г KJ и доводят объем раствора до 100 см3. Рабочий раствор йода может употребляться в течение 6 дней после его приготовления.
Техника определения. Для определения АС важно строго соблюдать температурные условия реакции. Для этого предварительно все растворы — субстрат (1%-ный раствор крахмала), раствор фермента и дистиллированная вода— должны быть нагреты до 30°С.
Предыдущая << 1 .. 17 18 19 20 21 22 < 23 > 24 25 26 27 28 29 .. 69 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама