Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Фармацевтика -> Грачева И.М. -> "Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов " -> 24

Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов - Грачева И.М.

Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С., Борисенко Е.Г. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. — 240 c.
Скачать (прямая ссылка): labpraktikumpotehfermentpreparatov1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 18 19 20 21 22 23 < 24 > 25 26 27 28 29 30 .. 69 >> Следующая

25 см3 субстрата помещают в широкую пробирку, в которую вставлена стеклянная палочка. 30 см3 вытяжки и 30 см3 воды наливают в отдельные пробирки, помещают в ультратермостат и выдерживают при температуре 30°С в течение 10 мин.
Затем в широкую пробирку к раствору крахмала, не вынимая пробирок из термостата, с помощью пипеток Добавляют от 1 до 25 см3 исходного ферментного раствора и соответствующее количество воды так, чтобы общий объем реакционной смеси был 50 см3. Если ферментная вытяжка малоактивна, то можно внести только ее в Количестве 25 см3, а воду вообще не добавлять.
Содержимое в пробирке перемешивают палочкой и отмечают время по секундомеру, когда была добавлена вытяжка к раствору крахмала. Каждые 60 с из пробир-Ки> не вынимая ее из термостата, отбирают палочкой каплю пробы. Каплю помещают на белую фарфоро-вУю пластину, соединяют эту каплю с каплей рабочего
раствора йода и наблюдают окраску. Реакция расщепления крахмала считается оконченной, когда йод пере, стает давать изменение окраски при соединении с кап. лей испытуемого раствора в течение первых 10 с. Изменение окраски йода отчетливо видно на границе сопри, косновения двух капель — йода и реакционной смеси.
Время, за которое происходит расщепление крахмала до продуктов, не окрашивающихся йодом, должно быть в пределах 10—20 мин.
Если время гидролиза крахмала менее 10 мин, тс определение повторяют, беря на гидролиз меньше вытяжки и больше воды. Если гидролиз крахмала не заканчивается в течение 20 мин, то анализ также повторяют, беря на определение больше ферментной вытяжке и меньше воды. Количество ферментной вытяжки, которое необходимо брать на повторный анализ, вычисляют с учетом полученного времени гидролиза.
Если ферментная вытяжка имеет малую или слишком высокую активность и количество ферментного раствора от 1 до 25 см3 не обеспечивает длительности гидролиза крахмала в течение 10—20 мин, для анализа берут не 25 см3 раствора крахмала, а большее или меньшее его количество, например 10 или 40 см3, внося соответствующую поправку в расчетную формулу (соответственно 0,1 или 0,4 вместо обычных 0,25 г).
Величину амилолитической активности АС (в ед./г) рассчитывают по формуле ЛС = 0,25-60/(/гт), где 0,25-количество крахмала, которое находится в 25 см3 его 1%-ного раствора, г; 60 — пересчет на 1 ч; « — количество фермента, участвующего в реакции, г или см3 (эта величина определяется с учетом концентрации исходной вытяжки и последующего разведения); т — время, за которое произошло расщепление крахмала до неокраши-ваемых йодом продуктов, мин.
Пример. Для анализа приготовлена ферментная вытяжка 5,3 воздушно-сухой культуры гриба. Исходный раствор приготовлю из расчета 5 г культуры на 1010 см3 забуференной воды. Извести0 что данная культура очень активна, поэтому сделано дополнительное разведение исходного раствора: 20 см3 доведено в мерной к0-’' бе до 50 см3 дистиллированной водой и оттуда на анализ взят° 2 см3, т. е. получепа такая последовательность разведений: 5 г ->-100 см3->-20 см3->-50 см3->-2 см3.
Для гидролиза Q.26 г крахмала (25 см3 1%-ного раствора кра*' мала) ферментным раствором последнего разведения (2 см3) потре’
бовалось 12 мин. Тогда АС воздушно-сухой культуры составит 0,25-60-50-100 -16(12-2-20-5) = 31,25 ед./г. '
При пересчете ферментативной активности на абсолютно сухое вещество ферментного препарата следует учитывать влажности и производить пересчет по формуле: АСсв = АС-'100(100— W), где
\р—влажность культуры или препарата, %.
Определение глюкоамилазной активности (ГлА)
Метод основан на количественном определении глюкозы, образующейся при гидролизе растворимого крахмала ферментом глюкоамилазой. Глюкоамилазная активность ГлА характеризует способность ферментного препарата катализировать расщепление растворимого крахмала до глюкозы и выражается числом единиц активности в 1 г препарата.
За единицу глюкоамилазной активности принято такое количество фермента, которое, гидролизуя растворимый крахмал при температуре 30°С и pH 4,7 в течение
1 мин, освобождает 1 мкмоль глюкозы.
Фермент глюкозооксидаза катализирует окисление d-глюкозы кислородом воздуха до глюконовой кислоты. Вторым продуктом реакции является пероксид водорода. Оба конечных продукта образуются в количествах, эквимолярных окисленной глюкозе. Пероксид водорода под влиянием фермента пероксидазы окисляет гексациано- (II) -феррат калия (калий железистосинеродистый, желтая кровяная соль), который переходит в ферроцианид калия, окрашенный в лимонно-желтый цвет. Интенсивность окраски .пропорциональна количеству образующейся глюкозы.
Необходимые реактивы. 1%-ный раствор крахмала (субстрат, употребляемый для анализа грибных препаратов, например Asp. niger, Asp. awamori, должен иметь pH 4,7, что достигается добавлением ацетатного буфера с pH 4,7 ; для анализа дрожжевых препаратов, например Endomycopsis sp. 20-9, pH субстрата должен быть равен 5,6, что достигается добавлением фосфатного буфера с pH 5,6); 1 М фосфатный буферный раствор с pH '>5 — смешивают равные объемы КН2Р04 (136 г безводного КН2Р04 в 1 дм3 дистиллированной воды) и КОН г КОН в 1 дм3 дистиллированной воды); насыщенная бензойная кислота — 2,7 г бензойной кислоты рас-
Предыдущая << 1 .. 18 19 20 21 22 23 < 24 > 25 26 27 28 29 30 .. 69 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама